EGF &; TGF使用指南

生長因子
解鎖實驗關鍵開關！
在微觀的細胞王國里，
沒有電話，沒有微信，
細胞們如何精準調控自己的命運？
何時分裂增殖？何時分化成熟？何時遷移修復？何時功成身退？

答案就藏在那些被稱為“生長因子”的蛋白質小分子中！它們如同細胞間的摩斯密碼，傳遞著至關重要的生命指令。今天，我們聚焦兩位“明星信使”：EGF（表皮生長因子）和TGF（轉化生長因子），揭秘它們的功能奧秘與實驗應用技巧！

01 認識EGF與TGF家族
EGF (EPIdermal Growth Factor) 表皮生長因子
  身份 ： 
最早被發現、研究最廣泛的生長因子之一，屬于EGF家族（包含HB-EGF, TGF-α等）。
 核心使命 ：
強力促進細胞增殖！
靶細胞： 
廣泛作用于上皮細胞、成纖維細胞、角質形成細胞、多種干細胞等。
關鍵作用：

• 刺激細胞分裂與增殖： 加速傷口愈合、組織修復。
• 促進細胞遷移： 在胚胎發育、傷口愈合中起關鍵作用。
• 抑制細胞凋亡： 維持細胞存活。
• 參與發育分化： 影響特定組織器官的形成。

 信號通路： 
結合細胞膜上的EGFR（表皮生長因子受體） → 觸發受體二聚化及自磷酸化 → 激活下游RAS-RAF-MEK-ERK (MAPK通路) 和 PI3K-AKT-mTOR通路 → 促進細胞周期進程（G1到S期）及生存。

02  TGF (Transforming Growth Factor) 轉化生長因子
身份： 
一個龐大的超家族，成員眾多，功能復雜多樣，甚至相反！最核心、研究最深入的是 TGF-β亞家族 (包括TGF-β1, β2, β3, Activins, Nodal, BMPs等)。
  核心使命：
  高度環境依賴，功能“雙面刃”！
靶細胞： 幾乎影響所有細胞類型。
關鍵作用 (以TGF-β1為代表)：

• 抑制增殖： 對大多數上皮細胞和免疫細胞是強效的生長抑制劑（使細胞停滯在G1期）。
• 促進分化： 誘導間充質干細胞向成骨細胞、軟骨細胞分化；參與上皮間質轉化（EMT），這在胚胎發育、傷口愈合（早期）、但也與腫瘤轉移相關。
• 刺激細胞外基質合成： 促進膠原等ECM蛋白產生，對組織纖維化至關重要（過度則導致病理性纖維化）。
• 免疫調節： 主要發揮免疫抑制作用，調節T細胞分化，維持免疫耐受。
• 促進凋亡： 在某些情況下誘導特定細胞死亡。

信號通路：
結合細胞膜上的II型受體 → 招募并磷酸化I型受體 → 激活受體調節的Smad蛋白 (R-Smads：Smad2/3 for TGF-β/Activin/Nodal, Smad1/5/8 for BMPs) → R-Smads與Co-Smad (Smad4) 形成復合物入核 → 調控靶基因轉錄。非Smad通路（如MAPK, PI3K）也參與復雜調控。

02  如何正確使用這些“魔法因子”？

關鍵操作要點：步步為營

01儲存與復溶
 嚴格按說明書操作！ 通常是凍干粉或高濃度溶液保存在-20°C或-80°C。
 復溶時使用無菌、無內毒素的溶劑（通常是含載體蛋白如BSA的緩沖液或培養用基礎液）。避免反復凍融！
 復溶后根據使用頻率分裝，儲存于-20°C或-80°C。工作液可在4°C短期存放（1-2周，依說明書）。

02工作濃度：黃金法則！
濃度范圍差異巨大！ 切忌經驗主義！
必查文獻！ 參考你所研究特定細胞類型的相關文獻中使用的濃度。
必看說明書！ 商品化因子會提供建議濃度范圍。
典型參考范圍 (需驗證！)：

• EGF: 常用 1 - 100 ng/mL (如原代角質形成細胞培養常加10-20 ng/mL)。
• TGF-β1: 常用 0.1 - 20 ng/mL。濃度過低可能無效，過高可能誘導非預期效應（如強EMT或過度纖維化）。1-5 ng/mL 常用于抑制增殖或誘導輕度EMT。
• 進行濃度梯度預實驗： 對于新細胞或關鍵實驗，務必設置不同濃度梯度（如0, 0.1, 1, 5, 10, 20 ng/mL），找到最優效果且無細胞毒性的濃度。

03添加方式
  直接加入培養基： 最常見方式。在無菌操作下，將計算好體積的生長因子溶液輕柔加入完全培養基中，充分混勻。
更換含因子培養基： 在需要精確控制作用時間或去除舊因子影響時（如誘導分化），吸掉舊培養基，加入新配制的含因子培養基。

04作用時間
EGF: 促進增殖通常需要持續暴露（每次換液都需添加）。
TGF-β: 其效應可能是時間依賴性的：

• 短期處理（幾小時到幾天）：可能快速激活信號（如磷酸化Smad2/3），誘導部分基因表達。
• 長期處理（數天到數周）：才能觀察到明顯的表型變化（如生長抑制、EMT、基質沉積、分化標志物表達）。需根據實驗目的設計處理時長。