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非洲豬瘟P30蛋白抗體抗體結構、對應毒株與制備方法_abio生物試劑品牌網

abiopp6個月前 (07-07)技術45

非洲豬瘟（African Swine Fever, ASF）是由非洲豬瘟病毒（ASFV）引起的一種高度傳染性、致死性豬傳染病，P30 蛋白是 ASFV 的重要結構蛋白，在病毒感染和免疫應答中具有關鍵作用，針對該蛋白的抗體在 ASF 的診斷、防控及相關研究中應用廣泛。以下從抗體結構、對應毒株、制備方法、特異性、交叉反應性等方面進行詳細說明：
一、非洲豬瘟 P30 蛋白的背景 P30 蛋白（也稱為 CP204L 蛋白）是 ASFV 編碼的一種囊膜相關蛋白，在病毒粒子組裝、釋放及與宿主細胞的相互作用中發揮重要作用。由于其免疫原性較強，且在不同 ASFV 毒株中相對保守，成為 ASF 診斷和疫苗研究的重要靶標蛋白。
二、抗 P30 蛋白抗體的結構抗 P30 蛋白的抗體（包括單克隆抗體和多克隆抗體）的基本結構遵循免疫球蛋白（Ig）的典型結構，以單克隆抗體為例：

整體結構：由兩條重鏈（H 鏈）和兩條輕鏈（L 鏈）通過二硫鍵連接形成 “Y” 型結構。
功能區域：
- 可變區（V 區）：位于 “Y” 型結構的頂端，由重鏈可變區（VH）和輕鏈可變區（VL）組成，負責特異性識別和結合 P30 蛋白的抗原表位。
- 恒定區（C 區）：包括重鏈恒定區（CH1、CH2、CH3）和輕鏈恒定區（CL），決定抗體的效應功能（如激活補體、結合 Fc 受體等），并與抗體的類型（如 IgG、IgM 等）相關。
常見類型：在 ASF 診斷中，抗 P30 蛋白單克隆抗體多為 IgG 型（如 IgG1、IgG2a 等），因其穩定性高、親和力強，適合用于檢測試劑的開發。

三、對應 P30 蛋白的 ASFV 毒株 P30 蛋白的編碼基因（CP204L）在 ASFV 的不同毒株中保守性較高，因此抗 P30 蛋白的抗體通常可識別多種 ASFV 毒株，包括：

基因 Ⅰ 型：如西非流行的毒株（如 L60 株）。
基因 Ⅱ 型：目前在全球范圍內（包括中國）流行的主要毒株（如 Georgia 2007 株及其變異株）。
其他基因型毒株：由于 P30 蛋白序列的保守性，抗體對多數基因型毒株的 P30 蛋白具有交叉識別能力，但具體識別范圍需通過實驗驗證。

四、抗 P30 蛋白抗體的制備方法
1. 單克隆抗體制備

免疫原制備：通常通過原核表達（如大腸桿菌）或真核表達（如昆蟲細胞、哺乳動物細胞）系統重組表達 P30 蛋白，純化后作為抗原免疫 Balb/c 小鼠等實驗動物。
雜交瘤細胞構建：
- 取免疫小鼠的脾臟細胞，與骨髓瘤細胞（如 SP2/0）融合，篩選能穩定分泌抗 P30 蛋白抗體的雜交瘤細胞株。
抗體純化：從雜交瘤細胞培養上清或小鼠腹水（通過腹腔接種雜交瘤細胞獲得）中，通過蛋白 A/G 親和層析等方法純化抗體。

2. 多克隆抗體制備

以重組 P30 蛋白免疫兔、羊等動物，收集血清后通過純化去除非特異性抗體，獲得抗 P30 蛋白的多克隆抗體，其優勢是可識別 P30 蛋白的多個抗原表位，但特異性相對單克隆抗體較低。

五、抗體的特異性抗 P30 蛋白抗體的特異性主要體現在：

與 ASFV 的特異性結合：能特異性識別 ASFV 感染細胞或病毒粒子中的 P30 蛋白，而不與其他豬源病毒（如豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒等）發生交叉反應。
表位特異性：單克隆抗體通常針對 P30 蛋白的單一抗原表位（線性表位或構象表位），多克隆抗體則可識別多個表位，因此在檢測中可根據需求選擇（如單克隆抗體適合精準檢測，多克隆抗體適合提高檢測靈敏度）。

六、交叉反應性（交叉率）

與其他病毒的交叉反應：由于 P30 蛋白是 ASFV 特有的蛋白，抗 P30 蛋白抗體通常不與其他豬病毒（如偽狂犬病病毒、豬圓環病毒等）交叉反應，交叉率極低（一般 < 1%），這是其用于 ASF 特異性診斷的關鍵優勢。
與不同 ASFV 毒株的交叉反應：因 P30 蛋白在 ASFV 各毒株中保守性較高，優質的抗 P30 抗體對不同基因型毒株的交叉反應率較高（可達 90% 以上），適用于檢測全球范圍內流行的 ASFV 毒株。但需注意，少數變異毒株可能因 P30 蛋白序列微小差異導致交叉反應率下降，因此需通過實驗驗證抗體對流行毒株的適用性。

七、應用領域