抗豬圓環病毒3型單克隆抗體的特性、單克隆抗體制備、抗體特性及應用_abio生物試劑品牌網
抗豬圓環病毒 3 型（Porcine circovirus type 3，PCV3）單克隆抗體（Monoclonal Antibody，mAb）是針對 PCV3 抗原（主要為病毒衣殼蛋白）制備的特異性抗體，在 PCV3 的診斷、致病機制研究及防控中具有重要價值。以下從 PCV3 的基本特性、單克隆抗體制備、抗體特性及應用等方面詳細介紹：
一、豬圓環病毒 3 型（PCV3）的基本特性 PCV3 是圓環病毒科圓環病毒屬的單鏈 DNA 病毒，2016 年首次在患病豬群中發現，與豬繁殖障礙、皮炎腎病綜合征、心肌炎等疾病相關。其核心抗原與病毒結構如下：
一、豬圓環病毒 3 型（PCV3）的基本特性 PCV3 是圓環病毒科圓環病毒屬的單鏈 DNA 病毒，2016 年首次在患病豬群中發現，與豬繁殖障礙、皮炎腎病綜合征、心肌炎等疾病相關。其核心抗原與病毒結構如下：
- 病毒結構：
- 抗原特性：
Cap 蛋白是 PCV3 的主要抗原，分子量約 21-23 kDa，其氨基酸序列中含多個線性或構象型抗原表位，可誘導機體產生特異性抗體，也是單克隆抗體識別的關鍵位點。
- 免疫原制備：
- 動物免疫：
- 通常選擇 BALB/c 小鼠，采用腹腔或皮下注射方式免疫：初次免疫用弗氏完全佐劑乳化抗原，加強免疫用弗氏不完全佐劑，間隔 2-3 周，共免疫 3-4 次；
- 末次免疫后 3-5 天，檢測小鼠血清抗體效價（通過 ELISA 或間接免疫熒光法），選擇效價高的小鼠用于細胞融合。
- 細胞融合與篩選：
- 取免疫小鼠的脾臟細胞（含 B 淋巴細胞）與骨髓瘤細胞（如 SP2/0），用聚乙二醇（PEG）誘導融合，獲得雜交瘤細胞；
- 通過 HAT 選擇培養基（篩選雜交瘤細胞，排除未融合的脾細胞和骨髓瘤細胞）培養后，采用間接 ELISA（包被重組 Cap 蛋白）或免疫熒光法（檢測與 PCV3 感染細胞的結合能力）篩選陽性克隆。
- 克隆化與抗體純化：
- 對陽性雜交瘤細胞采用有限稀釋法或單細胞克隆儀進行克隆化培養，確保單克隆來源；
- 克隆穩定后，通過小鼠腹腔接種或無血清培養基培養收集腹水或上清，經 Protein G/A 親和層析純化，獲得高純度 mAb。
- 分子特性：
- 抗體亞型：多為 IgG1 或 IgG2a（小鼠單克隆抗體常見亞型），少數為 IgM；
- 分子量：IgG 型抗體分子量約 150 kDa（由兩條重鏈和兩條輕鏈組成）；
- 親和力：通過 ELISA 測定的親和常數（Ka）通常在 10?-101? L/mol，高親和力抗體更適合高靈敏度檢測。
- 抗原識別特性：
- 識別表位：多數抗 PCV3 mAb 識別 Cap 蛋白的線性表位（如 Cap 蛋白的 N 端或 C 端保守序列），少數識別構象表位（依賴 Cap 蛋白的空間結構）；
- 特異性：需驗證與其他 PCV 亞型（如 PCV2、PCV4）及其他豬源病毒（如豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒）無交叉反應，確保對 PCV3 的專一性。
- 功能活性：
- 部分 mAb 可通過中和試驗驗證是否具有病毒中和活性（抑制 PCV3 對宿主細胞的感染），這類抗體可用于病毒致病機制研究或被動免疫防控。
- 臨床診斷試劑開發：
- 病毒學研究：
- 用于PCV3 的分離與鑒定（如免疫熒光法檢測病毒在細胞中的增殖）；
- 研究病毒入侵機制（通過抗體阻斷試驗分析 Cap 蛋白與宿主細胞受體的相互作用）；
- 分析 PCV3 的變異情況（通過抗體識別能力變化監測抗原表位變異）。
- 防控應用潛力：
- 高中和活性的 mAb 可用于被動免疫（如給新生仔豬注射，短期預防 PCV3 感染）；
- 作為 “抗獨特型抗體” 的免疫原，誘導機體產生抗 PCV3 的保護性抗體（潛在疫苗研發方向）。
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