Rhod-2AM 是一種常應用于細胞鈣離子檢測的熒光探針，尤其在 線粒體鈣信號（Mitochondrial Ca2? Signaling） 研究中具有獨特優勢，在細胞生物學研究中發揮著重要作用。
 
1.為什么選擇 Rhod-2AM 研究線粒體鈣？
高靈敏度：對低濃度 Ca2?（~nM-μM 范圍）響應靈敏。
線粒體靶向性：優于其他鈣探針（如 Fluo-4、Fura-2），減少胞質信號干擾。
雙模式檢測：適用于熒光顯微鏡（實時成像）和流式細胞術（群體分析）。
多通道兼容性：可與綠色熒光探針（如Fluo-4 AM）或藍色核染料（如Hoechst）聯用，實現多參數分析。
 
2.應用場景示例
線粒體鈣與細胞凋亡：檢測凋亡刺激（如 STS）下線粒體鈣超載與 mPTP 開放的關系。
能量代謝研究：結合 Seahorse 分析儀，關聯鈣信號與 OXPHOS 效率。
神經元活動：研究突觸后線粒體鈣瞬變（如與電生理聯用）。
 
3.使用技巧與注意事項
3.1優化染色條件
A.細胞密度：建議1X105 cells/mL，避免過度擁擠影響染料加載。
B.孵育時間：30-45分鐘（37℃），過長可能導致染料外排或細胞毒性。
 
3.2干擾因素控制
A. 避免使用含血清培養基（酯酶活性干擾），加載后徹底清洗減少背景信號。
B. 線粒體膜電位崩潰劑（如CCCP）可驗證染料定位特異性。
 
3.3數據分析： 
使用比率法（如與TMRM聯用）校正膜電位變化對熒光強度的影響。

圖示：
圖2.利用激光掃描共聚焦顯微鏡分析了細胞內游離 Ca2+ 的分布情況。
細胞內游離 Ca2+ 通過紅色熒光探針Rhod-2 AM進行檢測。細胞核用 DAPI（藍色）染色。攜帶 eGFP 報告基因的 pEZ-LV203 載體產生了綠色熒光蛋白。