方案摘要：牙膏中微生物指標的檢驗方法，主要涵蓋對菌落總數、耐熱大腸菌群、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、霉菌和酵母菌總數等項目的檢測。在檢測中，培養基自動制備分裝儀主要用于培養基的標準化制備與精確分裝，其應用原理結合了微生物培養的基本需求和自動化設備的技術優勢，結合自動菌落計數儀，可以達到快速檢測牙膏中菌落總數的作用，提高檢測效率。
 
方案詳情：
實驗原理牙膏檢樣經處理后，在特定條件（含培養基類型、培養溫度、培養時間、pH 值及需氧特性等）下進行培養，最終統計得出 1g 檢樣中所形成的微生物菌落總數。該結果涵蓋了在本方法規定條件下生長的嗜中溫需氧菌與兼性厭氧菌的菌落總數。測定菌落總數有助于判斷樣品受細菌污染的程度，是對樣品開展衛生學綜合評價的重要依據。

二、實驗準備
1、儀器和設備
①  自動菌落計數儀SHASHIN KAGAKU，PSF-1100。
②  三角瓶：250 mL。
③  量筒：200 mL。
④  pH計或精密pH試紙。
⑤  試管：18 mm×150 mm。
⑥  滅菌平皿：fluidot  FDT-9CM-2-S，直徑90 mm。
⑦  電動移液器：PIpetty  1 mL  MSIC01-02-1000。
⑧  吸頭：1.5mL   FDT-1500-1-TSF。
⑨  酒精燈。
⑩  恒溫培養箱：36℃±1℃。
?  恒溫水浴箱。
?  高壓滅菌器。
?  蠕動泵分液器：fluidot  600D。
?  自動液體分裝儀：fluidot  30001-PP。
?  RAYPA培養基自動制備分裝儀。
 
2、培養基和試劑
① SCDLP液體培養基
② 卵磷脂、吐溫80—營養瓊脂培養基
③ 0.5%氯化三苯四氮唑（2,3,5-triphenyl terazolium chloride，TTC）
     注：以上培養基使用RAYPA培養基自動制備分裝儀，自動制備、分裝。
 
  
三、實驗步驟
1、用Pipetty電動移液器吸取1:10的檢液2 mL，分別注入到兩個滅菌平皿內，每皿1 mL。另取1 mL注入到9 mL SCDLP液體培養基（或經過驗證等效或優于SCDLP的稀釋液）試管中（注意勿使吸管接觸液面），使用混勻模式充分混勻后，制成1:100檢液，更換吸頭，吸取2 mL，分別注入到兩個滅菌平皿內，每皿1 mL。樣品至少需進行1:10和1:100稀釋，如樣品含菌量高，還可再稀釋成1:1000，1:10000，……等，每個稀釋度應換一次吸頭。
2、將融化并冷至45℃~50℃的卵磷脂吐溫80營養瓊脂培養基傾注到平皿內，每皿約15 mL，隨即轉動平皿，使檢液與培養基充分混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉平皿，置36℃±1℃培養箱內培養48 h±2 h。同時吸取1 mL空白稀釋液加入滅菌空平皿中，加入約15 mL卵磷脂吐溫80營養瓊脂培養基，待瓊脂凝固后，翻轉平皿，置36℃±1℃培養箱內培養48 h±2 h，為空白對照。
3、為便于區別牙膏中的顆粒與菌落，可在每100 mL卵磷脂吐溫80營養瓊脂中加入1 mL 0.5%的TTC溶液，如有細菌存在，培養后菌落呈紅色，而牙膏的顆粒顏色無變化。
 
四、菌落計數方法
1、在自動菌落計數儀上按照表一的數值，設置好條件。
2、使用自動菌落計數儀，快速識別重疊或模糊的菌落，1-3秒出結果后保存，繼續識別其它的培養皿，直到所有培養皿計算完畢。
 
 
五、菌落計數及報告方法
1、首先選取平均菌落數在30~300之間的平皿，作為菌落總數測定的范圍。當只有一個稀釋度的平均菌落數符合此范圍時，即以該平皿菌落數乘其稀釋倍數報告之（見表1中例1）。
2、若有兩個稀釋度，其平均菌落數均在30~300之間， 則應求出兩菌落總數之比值來決定，若其比值小于或等于2，應報告其平均數，若大于2則以其中稀釋度較低的平皿的菌落數報告之（見表1中例2及例3）。
3、若所有稀釋度的平均菌落數均大于300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之（見表1中例4）。
4、若所有稀釋度的平均菌落數均小于30，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之（見表1例5）。
5、若所有稀釋度的平均菌落數均不在30~300之間，其中一個稀釋度大于300，而相鄰的另一稀釋度小于30時，則以接近30或300的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之（見表1中例6）。
6、若所有的稀釋度均無菌生長，報告數為每g小于10 CFU。
7、菌落計數的報告，菌落數在10以內時，按實有數值報告之，大于100時，采用二位有效數字，在二位有效數字后面的數值，應以四舍五入法計算。為了縮短數字后面零的個數，可用10的指數來表示（見表1報告方式欄）。在報告菌落數為“不可計”時，應注明樣品的稀釋度。