方案摘要：霉菌和酵母菌總數(shù)是衡量牙膏衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)，一般而言，這些指標(biāo)數(shù)值越高，表明產(chǎn)品的衛(wèi)生狀況越不理想。依據(jù)《GB/T 8372 - 2017 牙膏》的規(guī)定，牙膏產(chǎn)品需符合以下衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：菌落總數(shù)應(yīng)控制在≤500 CFU/g，霉菌和酵母菌總數(shù)應(yīng)≤100 CFU/g。本方法利用RAYPA培養(yǎng)基自動(dòng)制備分裝儀及自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀達(dá)到對(duì)培養(yǎng)基的快速制備和對(duì)牙膏中霉菌和酵母菌含量的快速檢測(cè)，為牙膏衛(wèi)生質(zhì)量的評(píng)估提供高效、準(zhǔn)確的技術(shù)支持。

 
方案詳情：
實(shí)驗(yàn)原理牙膏檢樣經(jīng)處理后，在特定條件下培養(yǎng)，通過(guò)計(jì)數(shù)每 1g 檢樣中形成的霉菌和酵母菌總數(shù)，可判斷牙膏被此類微生物的污染程度及整體衛(wèi)生狀況。本方法基于霉菌和酵母菌的獨(dú)特形態(tài)及培養(yǎng)特性，采用虎紅培養(yǎng)基，于 28℃±2℃恒溫培養(yǎng) 5 天，使用菌落計(jì)數(shù)儀對(duì)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的霉菌和酵母菌菌落進(jìn)行快速計(jì)數(shù)。
 
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、儀器和設(shè)備
① 恒溫培養(yǎng)箱：28℃±2℃。
② 振蕩器。
③ 三角瓶：250 mL。
④ 試管：18 mm×150 mm。
⑤ 滅菌平皿：直徑90 mm。
⑥ PIpetty電動(dòng)移液器：10 mL量程
⑦ 量筒：200 mL。
⑧ 酒精燈。
⑨ 高壓滅菌器。
⑩ 恒溫水浴箱。
? 自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀SHASHIN KAGAKU，PSF-1100。
? RAYPA培養(yǎng)基自動(dòng)制備分裝儀
 
2、培養(yǎng)基和試劑
① SCDLP液體培養(yǎng)基
② 虎紅（孟加拉紅）培養(yǎng)基
 
二、操作步驟
1、使用RAYPA培養(yǎng)基自動(dòng)制備分裝儀、自動(dòng)制備實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基，并分裝到平皿。
2、樣品稀釋：用Pipetty電動(dòng)移液器吸取1:10的檢液2 mL，分別注入到兩個(gè)滅菌平皿內(nèi)，每皿1 mL。另取1 mL注入到9 mL SCDLP液體培養(yǎng)基（或經(jīng)過(guò)驗(yàn)證等效或優(yōu)于SCDLP的稀釋液）試管中（注意勿使吸頭接觸液面），并充分混勻，制成1:100檢液，更換吸頭，吸取2 mL，分別注入到兩個(gè)滅菌平皿內(nèi)，每皿1 mL。樣品至少需進(jìn)行1:10和1:100稀釋，如樣品含菌量高，還可再稀釋成1:1000，1:10000，……等，每個(gè)稀釋度都需要更換1個(gè)吸頭。

 
3、取樣品稀釋液各2 mL，分別注入2個(gè)滅菌平皿內(nèi)，每皿1 mL，注入融化并冷卻至44℃~48℃的虎紅培養(yǎng)基，充分搖勻。凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置28℃±2℃培養(yǎng)5 d，觀察并記錄。同時(shí)吸取1 mL空白稀釋液加入滅菌空平皿中，加入約15 mL虎紅培養(yǎng)基，待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置28℃±2℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5 d，為空白對(duì)照。
三、計(jì)算方法
1、在自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀上按照表一的數(shù)值，設(shè)置好條件。
2、使用自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀，快速識(shí)別重疊或模糊的菌落，1-3秒出結(jié)果后保存，繼續(xù)識(shí)別其它的培養(yǎng)皿，直到所有培養(yǎng)皿計(jì)算完畢。
3、計(jì)算出每個(gè)培養(yǎng)皿上生長(zhǎng)的霉菌和酵母菌菌落數(shù)后，求出每個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)。
 
四、結(jié)果及報(bào)告
1、判定結(jié)果時(shí)，應(yīng)選取菌落數(shù)在5 CFU~50 CFU范圍之內(nèi)的平皿計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后，即為每g檢樣中所含的霉菌和酵母菌總數(shù)。
2、其他范圍內(nèi)的菌落數(shù)報(bào)告：
① 首先選取平均菌落數(shù)在30~300之間的平皿，作為菌落總數(shù)測(cè)定的范圍。當(dāng)只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí)，即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1中例1）。
② 若有兩個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30~300之間， 則應(yīng)求出兩菌落總數(shù)之比值來(lái)決定，若其比值小于或等于2，應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)，若大于2則以其中稀釋度較低的平皿的菌落數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1中例2及例3）。
③ 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1中例4）。
④ 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1例5）。
⑤ 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30~300之間，其中一個(gè)稀釋度大于300，而相鄰的另一稀釋度小于30時(shí)，則以接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之（見(jiàn)表1中例6）。
⑥ 若所有的稀釋度均無(wú)菌生長(zhǎng)，報(bào)告數(shù)為每g小于10 CFU。
⑦ 菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告，菌落數(shù)在10以內(nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)值報(bào)告之，大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，應(yīng)以四舍五入法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面零的個(gè)數(shù)，可用10的指數(shù)來(lái)表示（見(jiàn)表1報(bào)告方式欄）。在報(bào)告菌落數(shù)為“不可計(jì)”時(shí)，應(yīng)注明樣品的稀釋度。


 
3、每g牙膏含霉菌和酵母菌總數(shù)以CFU/g表示。