人類對大腦結(jié)構(gòu)與功能的探索始終是科學(xué)界的核心命題。傳統(tǒng)成像技術(shù)雖能提供宏觀解剖信息，卻難以捕捉單細(xì)胞水平的精細(xì)結(jié)構(gòu)。光學(xué)顯微技術(shù)雖具備高分辨率，但生物組織的光散射特性嚴(yán)重限制了成像深度。光學(xué)組織透明化技術(shù)經(jīng)歷了從溶劑法到水凝膠介導(dǎo)的主動(dòng)透明化方法的迭代升級，逐步實(shí)現(xiàn)了小鼠全身單細(xì)胞分辨率成像，并開始向靈長類及人腦組織拓展。其核心價(jià)值在于保留樣本完整性的同時(shí)，支持多輪分子標(biāo)記與多重信息提取，為神經(jīng)環(huán)路重建、腦疾病機(jī)制解析和發(fā)育動(dòng)態(tài)追蹤提供了不可替代的工具。然而，如何在透明化效率、形態(tài)保真度與分子兼容性之間取得平衡，仍是技術(shù)優(yōu)化的核心挑戰(zhàn)。

研究背景與技術(shù)挑戰(zhàn)
光學(xué)散射的本質(zhì)與透明化原理
生物組織的光散射主要源于水分（折射率1.33）與脂質(zhì)、蛋白質(zhì)（折射率1.50）之間的折射率差異。傳統(tǒng)組織切片技術(shù)雖能部分解決這一問題，但切片損傷與三維重建誤差限制了其在復(fù)雜神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)研究中的應(yīng)用。光學(xué)透明化技術(shù)通過化學(xué)置換或物理去除高折射率成分，實(shí)現(xiàn)了組織光學(xué)均勻性提升，使深層熒光顯微成像成為可能。

技術(shù)瓶頸與適配性差異
不同組織類型對透明化試劑的響應(yīng)差異顯著。溶劑法雖能快速脫脂，但易導(dǎo)致熒光淬滅和樣本收縮；水凝膠法雖保留分子完整性，卻需復(fù)雜電泳設(shè)備；而單純水化法則受限于透明化速度與樣本尺寸。此外，大體積樣本的均勻標(biāo)記、成像設(shè)備的通量限制，以及海量數(shù)據(jù)的自動(dòng)化分析，仍是阻礙技術(shù)規(guī)模化應(yīng)用的關(guān)鍵瓶頸。

技術(shù)創(chuàng)新與應(yīng)用
在腦科學(xué)領(lǐng)域已展現(xiàn)多維應(yīng)用價(jià)值。神經(jīng)環(huán)路重建方面，結(jié)合稀疏病毒標(biāo)記與光片顯微，實(shí)現(xiàn)了小鼠嗅覺球內(nèi)僧帽細(xì)胞的完整連接圖譜解析，揭示了嗅覺信息編碼的非冗余性特征；全腦細(xì)胞圖譜構(gòu)建中，CUBIC技術(shù)配合轉(zhuǎn)基因熒光蛋白，構(gòu)建了可編輯的小鼠全腦單細(xì)胞圖譜，支持神經(jīng)元亞型空間分布的可視化與量化；疾病模型解析中，iDISCO+技術(shù)揭示了阿爾茨海默病模型小鼠β淀粉樣斑塊的時(shí)空演化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)海馬區(qū)血管形態(tài)異常早于認(rèn)知衰退；腦血管網(wǎng)絡(luò)可視化方面，SeeNet技術(shù)通過膽鹽透明化與血管鑄型，實(shí)現(xiàn)了皮層血管平行排列模式的三維解析，為腦缺血再灌注損傷研究提供了新視角。

成像實(shí)驗(yàn)與結(jié)果分析
高分辨率成像技術(shù)的協(xié)同創(chuàng)新
光片顯微鏡與雙光子成像的協(xié)同創(chuàng)新，顯著提升了透明化樣本的成像效率。以CLARITY技術(shù)為例，其透明化的小鼠全腦經(jīng)多輪免疫標(biāo)記后，可在光片顯微鏡下以2μm體素分辨率采集數(shù)據(jù)，完整呈現(xiàn)基底前腦膽堿能神經(jīng)元的全腦投射網(wǎng)絡(luò)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，中腦多巴胺能神經(jīng)元在黑質(zhì)致密部的空間聚類特性，與帕金森病模型中的選擇性退行高度相關(guān)。

總結(jié)與展望
光學(xué)組織透明化技術(shù)通過突破生物組織光散射限制，實(shí)現(xiàn)了從宏觀解剖到單細(xì)胞水平的三維解析，成為解密腦功能與疾病機(jī)制的“終極透鏡”。其核心價(jià)值在于兼容分子標(biāo)記、形態(tài)保真與大數(shù)據(jù)挖掘，已在神經(jīng)環(huán)路重建、腦疾病時(shí)空演化分析及發(fā)育動(dòng)態(tài)追蹤中展現(xiàn)革命性作用。當(dāng)前技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)小鼠全腦單細(xì)胞成像，更向靈長類及人腦拓展，如SHANEL技術(shù)首次實(shí)現(xiàn)成人全腦透明化，揭示皮層血管的種屬特異性分支模式。隨著光學(xué)工程、計(jì)算生物學(xué)與臨床神經(jīng)科學(xué)的深度交叉，該技術(shù)有望成為貫穿基礎(chǔ)研究到臨床診療的全鏈條工具。

論文信息
聲明：本文僅用作學(xué)術(shù)目的。
Liang X, Luo H. Optical Tissue Clearing: Illuminating BrAIn Function and Dysfunction. Theranostics. 2021 Jan 1;11(7):3035-3051. 

DOI:10.7150/thno.53979.