文章來源公眾號：Of Studies 作者：Of Studies 上個月底Science上線了一篇體內制備CAR-T的文章，第一單位就是6月底剛剛被艾伯維（AbbVie）以高達21億美元現金對價收購的Capstan Therapeutics，在前面分享過這個研究團隊在2022年發的一篇Science， CD5靶向的LNP體內生成CART細胞治療心肌纖維化，團隊里面有CAR-T大牛Carl H. June，2023年諾獎獲得者Drew Weissman等，把這篇新的文章再分享給大家： 技術關鍵點

• tLNP平臺設計

新型離子化脂質LiPId L829： 顯著減少肝臟脫靶遞送， 快速代謝，毒性更低。
CD8+ T細胞靶向：通過抗CD8抗體修飾LNP，精準遞送mRNA至CD8+細胞毒性T細胞（避免CD4+細胞引發細胞因子風暴）。

• mRNA優化

優化CAR（抗CD19）mRNA的UTR和密碼子，使表達效率提升10倍，功能更強（細胞毒性、增殖、細胞因子釋放）。 主要內容
1、可電離脂質L829（Ionizable lipid L829）可減少tLNP對肝臟的脫靶遞送 A:tLNP由五類脂質構成，表面偶聯抗體（靶向配體），內包mRNA。 B:Benchmark LNP，強熒光信號在肝和脾，表明肝脫靶嚴重。L829-tLNP信號集中在脾臟，肝臟脫靶明顯降低。表明L829減少了肝非特異攝取，提高了靶向遞送效率。 C:L829在肝中清除更快，24小時基本排出；Benchmark脂質仍持續存在。表明L829具有更好的代謝與安全性特征。 D:L829組炎癥標志物水平明顯低于Benchmark組，說明L829誘導的全身炎癥反應更低，更安全。 E:L829組比Benchmark組表現出更低的肝酶升高，說明L829在非人靈長類（猴）中也表現出更好肝安全性。 F:比較CD5-LNP與 CD8-LNP，CD8-LNP高度集中在CD8+T細胞，幾乎無在其他細胞類型。CD5-LNP分布更廣，部分表達在CD4+T、B細胞、單核細胞中。說明CD8-LNP具有更強的靶向特異性。 CD5 抗體修飾的 tLNP 會有更大比例脫靶到非效應細胞，而 CD8能夠更精準地定位到 CD8? T 細胞。 G:在人源化小鼠模型中，CD8-LNP成功將mRNA遞送至人源CD8? T細胞，CD4表達極低。 2、對anti-CD19的CAR mRNA的優化，提升了其在T細胞中的表達水平和功能活性。 3、裝載B細胞靶向CAR的tLNP在自身免疫患者樣本和人源化小鼠中迅速誘導B細胞耗竭 4、使用裝載B細胞靶向CAR mRNA的tLNP治療，可在食蟹猴體內實現深度B細胞清除。  















3次給藥（0.5–2.0 mg/kg）可深度清除B細胞（外周血、脾臟、淋巴結），CAR+ CD8+ T細胞峰值達85%。















    5、經tLNP治療實現全面B細胞清除后，B細胞譜系恢復過程中以初始B細胞為主。    
C1001、C3002、C4002 等是 食蟹猴（cynomolgus monkey）實驗中的動物個體編號。   小結
tLNP能夠避免傳統CAR-T的淋巴清除毒性，擺脫專業化CAR-T中心限制，適用于大規模自身免疫病群體（全球約10%人口）；mRNA瞬時表達，避免病毒載體導致的長期B細胞缺失或繼發惡性腫瘤；未來需探索長期重復給藥安全性、推進自身免疫病（如狼瘡）和B細胞惡性腫瘤的臨床試驗。