蛋白質，作為生命活動的主要執行者，構成了生命的物質基礎。中心法則的提出讓分子—蛋白研究得以具象化，DNA 的復制、轉錄和翻譯，使神奇而復雜的生命現象得以解析。

從序列的合成至其轉化鑒定，再到蛋白質的表達以及最終的純化，每一個環節都需要精確且細致的設計而這一全過程的探索，無疑為我們打開了生命研究的新視野。在此過程中，MCE 提供全品類的產品和全方位的服務助力您的科學研究。

1 載體構建及檢測

載體構建是生物技術中的一項關鍵步驟，主要用于克隆、表達特定基因以及進行基因編輯等研究。MCE 提供分子克隆工具、瓊脂糖凝膠電泳等產品，使您的載體構建和分析檢測過程更加快捷高效。

 
2 蛋白樣本制備

蛋白樣本制備是蛋白生物學實驗的核心步驟。其主要目的是：從組織或細胞中提取蛋白質，用于蛋白質純化和濃縮，進而檢測和分析。MCE 提供的抑制劑 CocktAIl 和裂解液能在最大程度上確保蛋白的有效提取，為您的實驗研究提供有力保障。

 
3 蛋白純化

蛋白純化的目的是從復雜的樣本(如細胞裂解液或組織提取物)中篩選、提取出特定的蛋白質。在分子克隆載體構建設計時，通過添加易于檢測的標簽實現后續蛋白質的純化。MCE 提供磁珠、瓊脂糖磁珠、瓊脂糖等純化介質，能夠有效地純化帶有 HA、c-Myc、His、GST、Flag 等標簽的蛋白質，同時 MCE 也提供抗體純化相關產品。

 
4 蛋白檢測分析

蛋白質分析檢測在生物化學和分子生物學實驗中扮演著重要的角色。MCE 可提供一套全面的產品工具，以助力您高效進行蛋白質的純度、大小和濃度等檢測。

 
客戶驗證：

穩定可靠，重復性高

特異性強，背景干凈

 
5 常見問題解答

1. HY-K1004 與 HY-K1007 兩款核酸染料的區別是什么？

 
2. PCR 擴增效率低，條帶較弱或無擴增，該如何解決？

(1) 酶：實驗表明，PCR 酶對于 DNA 具有一定的偏好性。如使用一種酶經過優化難以獲得理想擴增時，可以嘗試其它 PCR 酶。

(2) 模板引物：確保模板、引物的品質，保證沒有降解。另外，如果模板含有較多的抑制物時(如植物基因組模板)，推薦使用抗抑制能力強的 PCR 酶；還可以對模板進行梯度稀釋后擴增，摸索合適的模板用量。

(3) 反應體系與條件：增加循環數、降低退火溫濕度、適當提高 Mg2+工作濃度，都可以提高擴增效率，但同時會導致特異性與保真性下降，需要根據具體的實驗要求優化合適的條件。

3. 現有幾款裂解液之間有什么區別？該如何選擇？

 
4. 抑制劑該如何選擇？

注：HY-K0021 和 HY-K0023 均為 HY-K0022 的有效補充，使用時建議選擇組合形式：HY-K0021 + HY-K0022 或 HY-K0022 + HY-K0023 ，可以單獨使用，但不推薦。

5. His 標簽蛋白純化后蛋白純度不佳，是什么原因導致的？有哪些方法可以改善？

(1) 洗脫條件：使用咪唑濃度梯度或 pH 值梯度洗脫。不同蛋白質最佳洗脫條件不同，需要摸索優化；

(2) 介質因素：雜蛋白與介質可能存在非特異性結合，可以在在平衡緩沖液與樣品緩沖液中加入一定濃度的咪唑 ( 推薦濃度 : ≤ 20 mM，因蛋白而異 )，降低非特異性結合；

(3) 蛋白間作用：雜蛋白與目的蛋白可能存在非特異性結合，可以在在平衡緩沖液與樣品緩沖液中加入非離子型去垢劑( Triton X-100: ≤ 1% )、甘油 ( ≤ 10% )、NaCl ( ≥ 300 mM )、還原劑 ( β- 巰基乙醇 : ≤ 20 mM ) 等組分；

(4) 目的蛋白降解：建議在低溫下純化目的蛋白，并在平衡緩沖液與樣品緩沖液中加入蛋白酶抑制劑( 如 HY-K0010、HY-K0011 等 )；

(5) 存在表達提前終止：表達終止導致蛋白未正確攜帶標簽，建議更換表達載體。

6. 磁珠與瓊脂糖凝膠產品應該如何選擇？

(1) 免疫沉淀( 當樣品體積 < 2 mL )。在日常小型分離特定蛋白質和蛋白復合物時，磁珠可實現結合能力/得率、可重復性純度和成本節約之間的平衡。當進行手動和自動化標準 IP、Co-IP、ChIP、ChIP-Seq、RIP 和 pull-down 反應并立即用于后續檢測分析時，磁珠是最佳選擇。

(2) 蛋白質純化(當樣品體積 > 2 mL)。當需要獲得大量目標蛋白時，可選用瓊脂糖凝膠，瓊脂糖適用于柱親和色譜或獨立大型旋轉杯免疫沉淀反應。

7. 為什么蛋白質印跡條帶大小與預期的不同？

蛋白質印跡是一種基于蛋白質大小來分離蛋白質的技術。一般來講，蛋白質越小，在膠上的遷移速度越快。但遷移速度也受其它因素的影響，因此，觀察到的實際條帶大小可能與預測的不同。

常見的因素：
(1) 翻譯后修飾：磷酸化、糖基化等，蛋白實際會偏大
(2) 翻譯后切割：許多蛋白先被合成為前蛋白，然后被切割產生活性形式，例如前半胱天冬酶，蛋白實際會偏小；
(3) 剪接變體和異形體：可變剪接和異形體可能從同一基因產生不同大小的蛋白質；
(4) 聚體：蛋白質形成多聚體。這種情況通常在還原條件下可以緩解，但強相互作用會導致較大的條帶出現。


6 Publications Citing Use of MCE Products

[1] Cell. 2024 Feb 15;187(4):882-896.e17.
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[5] Nature. 2023 Mar;615(7951):349-357.
[6] Cancer Cell. 2024 May 13;42(5):869-884.e9.
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[14] Cell Host Microbe. 2024 Feb 14;32(2):191-208.e9.
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