基因編輯技術的原理及其在基因篩查、動物細胞模型構建等中的應用_abio生物試劑品牌網(wǎng)
基因編輯（gene editing）是一種基于人工核酸酶的遺傳操作技術，能對生物體特定目標基因進行高效修飾。簡單地說，基因編輯包括在活細胞的基因組中有針對性地插入、刪除或替換 DNA。從上世紀末人們就開始對基因編輯技術進行探索，在此期間一系列高效核酸酶不斷被發(fā)現(xiàn)，使基因編輯技術得到了快速發(fā)展和廣泛應用。但直到 2013 年 CRISPR/Cas9 技術成功應用于哺乳動物細胞，才極大地推動了基因編輯技術的發(fā)展熱潮。基因編輯技術作為一項重要的工具，在基因篩查、動物細胞模型構建等基礎研究中發(fā)揮著重要的作用，也為許多疾病的基因治療提供了新的思路。
同源重組技術（homologous recombination，HR）是較早使用的基因編輯技術，其原理是將外源性目的基因?qū)胧荏w細胞，通過同源序列交換，使外源性 DNA 片段取代原位點上的基因，從而達到使特定基因失活或修復缺陷基因的目的。由于 HR 效率極低，且出錯率高，因此其應用受到了一定的限制。 20 世紀 80 年代末、90 年代初，人們發(fā)現(xiàn)通過在特定的基因組靶點誘導雙鏈斷裂（double-stranded break，DSB），能在染色體水平上實現(xiàn)高效和準確的基因修飾。DSB 被誘導后，細胞內(nèi)將啟動兩種主要的修復機制：非同源末端連接（nonhomologous end joining，NHEJ）和同源定向修復（homology directed repAIr，HDR）。NHEJ 不依賴模板直接連接 DNA 兩端，可以在 DSB 位點有效產(chǎn)生不同長度片段的插入或缺失，通常導致基因功能失活；而在 HDR 中，斷裂鏈依賴于模板進行定向修復，可以實現(xiàn)特定位點的精確插入、缺失或者堿基置換。此后，科學家便專注于開發(fā)各種基于核酸內(nèi)切酶機制的基因編輯技術，以實現(xiàn)對特定基因組位點 DSB的精確誘導。
基因編輯技術原理
主要基因編輯技術及原理 目前主流的基因編輯技術包括鋅指核酸酶（ZFN）、轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應物核酸酶（TALEN）和 CRISPR-Cas 系統(tǒng)，它們的核心原理都是 “精準切割 DNA + 細胞自身修復機制”。 1. 鋅指核酸酶（ZFN）
- 結構：由 “鋅指蛋白（DNA 識別域）” 和 “FokI 核酸酶（切割域）” 組成。
- 原理：
- 鋅指蛋白通過識別特定的 DNA 堿基序列（每 3 個堿基對應一個鋅指結構），精準結合到目標基因位置。
- 兩個 ZFN 分子分別結合到目標序列的兩側(cè)，F(xiàn)okI 核酸酶在二聚化后發(fā)揮活性，切斷雙鏈 DNA。
- 細胞通過非同源末端連接（NHEJ）或同源重組（HDR）修復斷裂的 DNA，從而實現(xiàn)基因的插入、刪除或替換。
- 結構：由 “TALE 蛋白（DNA 識別域）” 和 “FokI 核酸酶（切割域）” 組成。
- 原理：
- TALE 蛋白的識別單元由 34 個氨基酸組成，其中第 12 和 13 位氨基酸（重復可變雙殘基，RVD）決定其識別的堿基（如 NI 識別 A，NG 識別 T 等），通過串聯(lián)不同 RVD 的單元，可精準識別任意 DNA 序列。
- 與 ZFN 類似，兩個 TALEN 分子分別結合目標序列兩側(cè)，F(xiàn)okI 二聚化后切割 DNA，再通過細胞修復機制實現(xiàn)基因編輯。
- 核心組成：CRISPR（成簇規(guī)律間隔短回文重復序列）和 Cas（CRISPR 相關蛋白，如 Cas9）。
- 原理：
- 識別階段：人工設計的 sgRNA（單引導 RNA）通過堿基互補配對，精準結合到目標 DNA 序列，同時引導 Cas9 蛋白定位到該位置。
- 切割階段：Cas9 蛋白具有核酸酶活性，可在 sgRNA 結合的位置切斷雙鏈 DNA，產(chǎn)生平末端斷裂。
- 修復階段：
- 非同源末端連接（NHEJ）：細胞快速修復斷裂，但容易引入堿基的插入或缺失，導致基因功能失活（常用於敲除基因）。
- 同源重組（HDR）：若提供含目標序列的同源模板，細胞會以模板為參照修復 DNA，實現(xiàn)基因的精準插入或替換（常用於基因敲入）。
本站“ABIO生物試劑品牌網(wǎng)”圖片文字來自互聯(lián)網(wǎng)
如果有侵權請聯(lián)系微信: nanhu9181 處理，感謝~
