貓皰疹病毒（Feline Herpesvirus 1, FHV-1）的 VP26 蛋白是病毒衣殼的次要衣殼蛋白（SCP），與主要衣殼蛋白 VP5 結合形成衣殼表面結構，其抗體在病毒結構研究、診斷技術開發及免疫機制分析中具有獨特價值。以下從 VP26 蛋白抗體的核心特性、制備要點及應用方向展開說明：

一、VP26 蛋白的分子特征與抗體作用基礎
VP26 由 FHV-1 的 UL35 基因編碼，是皰疹病毒科高度保守的次要衣殼蛋白，分子量約 12-15 kDa。其核心功能是通過與 VP5（主要衣殼蛋白）的相互作用，穩定病毒衣殼結構并參與衣殼組裝。

• 抗原性特點：VP26 分子量小但表位豐富，尤其是與 VP5 結合的區域及暴露于衣殼表面的片段，具有較強的免疫原性，可誘導機體產生特異性抗體；
• 保守性：與其他皰疹病毒（如人單純皰疹病毒 HSV-1、犬皰疹病毒 CHV）的 VP26 同源性約 50%-70%，部分表位具有種間交叉性，但也存在 FHV-1 特有的特異性表位，為抗體的特異性設計提供基礎。

二、VP26 蛋白抗體的制備方法
VP26 抗體的制備需以 VP26 蛋白為抗原，流程與 VP5 抗體類似，但因 VP26 分子量小、易降解，需特別優化抗原制備和免疫策略：
1.  抗原制備的關鍵優化

• 重組表達系統選擇： 
  • 優先采用融合表達（如與谷胱甘肽轉移酶 GST、組氨酸標簽 His?或麥芽糖結合蛋白 MBP 融合），增強 VP26 的可溶性和穩定性；
  • 表達系統推薦昆蟲細胞（桿狀病毒）或哺乳動物細胞，更接近天然蛋白的折疊狀態，優于大腸桿菌（易形成包涵體）。
• 純化與驗證：通過親和層析純化后，需經 SDS-PAGE 和 Western blot 驗證蛋白純度（純度需＞90%），并通過圓二色譜檢測二級結構（確保折疊正確，保留免疫原性）。

2.  抗體制備策略

• 多克隆抗體制備：

  • 免疫動物選擇：因 VP26 免疫原性中等，優先選擇對小分子抗原反應強的兔或山羊；
  • 免疫方案：初次免疫用高劑量抗原（50-100 μg / 只）配合完全弗氏佐劑，加強免疫時增加抗原劑量或縮短間隔（如每 10 天一次），以提升抗體效價；
  • 純化：除常規蛋白 A/G 層析外，可通過 VP26 抗原親和柱進一步純化，降低非特異性結合。

• 單克隆抗體制備：

  • 免疫小鼠時，可采用 “低劑量多次免疫” 策略（如每次 20-30 μg，共 4-5 次），促進特異性 B 細胞克隆增殖；
  • 雜交瘤篩選階段，需通過 ELISA（檢測與重組 VP26 的結合）和 IFA（檢測感染細胞中 VP26 的定位）雙重驗證，確保抗體能識別天然狀態的 VP26。

三、VP26 蛋白抗體的核心特性

1. 特異性

   • 可特異性識別 FHV-1 的 VP26 蛋白，與 VP5 等其他衣殼蛋白無交叉反應；
   • 部分抗體可能與其他皰疹病毒（如 HSV-1）的 VP26 存在弱交叉（因保守序列），需通過表位分析（如合成 FHV-1 特有肽段作為抗原）篩選高特異性抗體；
   • 驗證方法：通過 Western blot 排除與非感染細胞蛋白的結合，通過競爭性 ELISA 驗證與 VP26 抗原的特異性結合。

2. 靈敏度

   • 因 VP26 在病毒顆粒中含量低于 VP5，其抗體的靈敏度要求更高，優質抗體的 ELISA 檢測下限可達 pg 級（針對重組蛋白）；
   • 受限于 VP26 在病毒中的低豐度，檢測樣本中病毒抗原時需配合濃縮處理（如離心富集病毒顆粒）。

四、VP26 蛋白抗體的應用場景

1. 病毒結構與組裝機制研究

   • 衣殼組裝動態追蹤：利用熒光標記的 VP26 抗體，通過活細胞成像技術觀察 VP26 與 VP5 的結合過程（如核內組裝階段的共定位），揭示衣殼從 “空衣殼” 到 “成熟衣殼” 的組裝步驟；
   • 相互作用蛋白篩選：通過免疫共沉淀（Co-IP）結合質譜分析，鑒定與 VP26 相互作用的病毒蛋白（如其他衣殼蛋白）或宿主蛋白（如核孔蛋白），闡明病毒衣殼運輸的分子機制。

2. 病毒診斷與檢測

   • 抗原檢測試劑：作為夾心 ELISA 的檢測抗體，與 VP5 抗體聯合使用（提高檢測靈敏度），用于檢測臨床樣本（如眼鼻分泌物）中的 FHV-1 顆粒，尤其適用于急性感染期的早期診斷；
   • 病毒滴度測定：通過間接免疫熒光（IFA）計數 VP26 陽性細胞，快速評估病毒培養物的感染力（比傳統空斑實驗更高效）。

3. 疫苗研發輔助

   • 評估減毒活疫苗的安全性：通過 VP26 抗體檢測疫苗病毒在宿主細胞中的復制水平，驗證其減毒效果；
   • 優化亞單位疫苗：分析 VP26 蛋白的免疫原性（如與 VP5、囊膜糖蛋白 gD 聯合使用時的協同免疫效果），為多組分疫苗設計提供依據。

貓皰疹病毒 VP26 蛋白抗體雖因靶向 “次要衣殼蛋白” 而應用場景不及囊膜糖蛋白（如 gB、gD）抗體廣泛，但其在 病毒衣殼組裝機制研究和 高靈敏度抗原檢測中具有不可替代的價值。制備時需重點解決 VP26 蛋白的可溶性表達和抗體特異性優化問題，而應用中常與其他蛋白抗體（如 VP5、gB）聯合，以提升檢測或研究的全面性。