什么是自發(fā)熒光（Autofluorescence, AF ）？
自發(fā)熒光是指 細(xì)胞本身的內(nèi)源性物質(zhì)（如NADH、FAD、芳香族氨基酸等）在特定波長激發(fā)下產(chǎn)生的熒光信號。
在流式細(xì)胞術(shù)中，自發(fā)熒光會干擾弱標(biāo)記信號的檢測，尤其在 400–600 nm 波段影響嚴(yán)重，導(dǎo)致：

• 熒光信號識別不清，弱陽性信號被掩蓋
• 髓系細(xì)胞、死細(xì)胞等高AF細(xì)胞造成假陽性
• 結(jié)果可重復(fù)性與分析特異性降低

 
為什么光譜流式也難以直接解決AF 問題？
盡管光譜流式細(xì)胞術(shù)具備 全波段光譜解混能力，但自發(fā)熒光仍是挑戰(zhàn)：

難點	表現(xiàn)
異質(zhì)性強	不同細(xì)胞AF光譜差異大，難統(tǒng)一建模
信號疊加	高AF會掩蓋低豐度靶標(biāo)
光譜重疊	AF光譜與染料發(fā)射譜重合，易誤判

圖：AF在光譜流式中的典型干擾
圖示案例中展示了：
A. 各類細(xì)胞AF背景差異
B. 高AF導(dǎo)致弱信號消失
C. AF與目標(biāo)染料光譜重合，干擾解混
 
 CytoFLEX mosAIc 如何破解AF 干擾？
貝克曼庫爾特CytoFLEX mosaic 光譜流式分析儀，從底層設(shè)計上強化了解決AF問題的能力：
核心優(yōu)勢：

• 提供10個未染色通道：支持多通道AF提取建模
•  支持異質(zhì)性樣本分析：構(gòu)建不同細(xì)胞群的AF特征
•  搭載Poisson Hybrid解混算法：提升信號精度，降低假陽性率
• 實時異常通道預(yù)警機制：確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠

 
實驗驗證：AF 建模如何改善數(shù)據(jù)質(zhì)量？
使用CytoFLEX mosaic評估白細(xì)胞群體譜解混效果。通過分別引入0、1、2、4個自發(fā)熒光特征，比較CD16在不同白細(xì)胞亞群中的表達(dá)結(jié)果：

• 未去除AF時，假陽性信號較多
• 去除4個AF特征后，保留真實信號，明顯提升弱信號可分辨性
• 涉及細(xì)胞群體：中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞

結(jié)論： AF 提取+ 多通道解混顯著提升了解析準(zhǔn)確性。
 
光譜流式中自發(fā)熒光的四大應(yīng)對策略

策略	說明
1. 將AF視為內(nèi)源性熒光	可利用其光譜特征提高低豐度標(biāo)記識別能力
2. 使用多對照捕獲AF變異	CytoFLEX mosaic支持10個未染色通道，適用于復(fù)雜樣本
3. 使用微球/細(xì)胞對照校正串聯(lián)染料	防止AF疊加影響解混
4. 結(jié)合降維、門控聚類方法	Poisson Hybrid算法提高解混分群精度

 
軟件支持與用戶體驗
CytoFLEX mosaic搭配的軟件 CytExpert for Spectral：

• 界面簡潔，易于上手
• 解混結(jié)果實時驗證，支持通道問題自動提示
• 圖形化顯示，有效輔助策略優(yōu)化與門控調(diào)整

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推薦閱讀與參考資料

1. Overcoming Autofluorescence in Spectral Flow Cytometry Analysis
2. Enhanced Spectral Unmixing of White Blood Cell Populations

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結(jié)語：精準(zhǔn)識別，從自發(fā)熒光開始
光譜流式不再“怕光”！
CytoFLEX mosaic通過自發(fā)熒光多通道提取 + 高級算法，打破AF困境，重塑多色流式分辨率上限。是實現(xiàn) 高靈敏、低背景、弱信號可見化的關(guān)鍵利器。