關鍵詞：膽管上皮細胞，肝內膽管上皮細胞，3D細胞培養，類器官，3D膽管模型、肝膽管類器官，膽管上皮細胞類器官，肝內膽管上皮細胞上皮-間充質轉化，Biliary EPIthelial Cells（BECs），Intrahepatic Biliary Epithelial Cells（IBEpiCs），Organoids，Hepatobiliary Organoid（HBO），Epithelial-mesenchymal transition（EMT），膽汁淤積藥物篩選和毒性評價，肝纖維化膽管反應模型，肝內膽管癌侵襲機制；

肝臟是人體代謝、分泌、解毒和免疫的核心器官，其功能依賴于肝實質細胞和非實質細胞的多細胞協同作用。肝內膽管上皮細胞（Intrahepatic Biliary Epithelial Cells,IBEpiCs)是位于肝臟內部的膽管上皮細胞（Biliary epithelial cells，BECs）。作為肝臟的一種非實質細胞，IBEpiCs具有分泌吸收、損傷修復和免疫屏障等多種功能，對于維持肝臟的正常生理功能具有重要作用。同時，IBEpiCs的異常改變與多種肝膽疾病有著密不可分的聯系，利用IBEpiCs構建3D膽管模型、肝膽管類器官及膽管上皮細胞類器官，可為肝膽疾病機制和藥物篩選提供更加高效的體外研究模型。本文簡要介紹肝內膽管上皮細胞的特點及其在肝臟疾病中的作用機制，以供參考。

01 肝內膽管上皮細胞簡介
肝內膽管上皮細胞（Intrahepatic Biliary Epithelial Cells,IBEpiCs)占肝臟細胞總數的3%～5%，是構成肝內膽管系統的主要功能細胞，分布于肝內二級膽管及其分支以上的膽管系統，主要覆蓋肝左葉和右葉的膽管分叉處。IBEpiCs呈立方或柱狀，具有頂膜和基底外側膜，從其頂膜延伸出來的微絨毛和初級纖毛具有特征性，微絨毛使細胞表面積增加了5倍，初級纖毛則能感受機械、化學刺激以及滲透壓的改變，是維持其細胞穩態的關鍵。IBEpiCs的肌動蛋白細胞骨架具有助于維持膜張力、穩定細胞形態和調節囊泡運輸的功能。

IBEpiCs具有分泌與吸收、炎癥修復和免疫屏障等作用，具體如下：

分泌與吸收
IBEpiCs的頂膜和基底外側膜存在不同的離子載體和通道，分泌和吸收各種物質。IBEpiCs主要分泌物之一是膽汁，占膽汁總排出量的40%，其在膽汁生成中至關重要。此外，IBEpiCs還可以吸收膽汁酸、葡萄糖、氨基酸、水和各種離子，通過相關的轉運蛋白和通道蛋白實現雙向運輸。

炎癥與修復
IBEpiCs參與肝臟損傷引起的炎癥和修復反應。IBEpiCs經各種損傷激活后可分泌多種細胞因子和趨化因子，包括轉化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、IL-8、CCL2、血小板源性生長因子-B（platelet derived growth factor-B，PDGF-B）等，這些因子會以自分泌和旁分泌的方式參與炎癥反應，致使IBEpiCs增殖、凋亡和衰老。隨著炎癥反應加劇，受損膽管周圍瘢痕組織過度沉積，引發病理性修復反應。

免疫屏障
IBEpiCs擁有復雜的免疫機制，是肝臟免疫調節的重要組成部分，IBEpiCs在未被激活狀態下，分泌包含IgA在內的多種抗菌蛋白，具有潛在的抗菌作用和免疫功能。IBEpiCs表達的Toll樣受體（toll-like receptors，TLRs），在識別抗原后會分泌抗菌蛋白、炎癥性細胞因子和黏附分子。同時，IBEpiCs作為抗原呈遞細胞還可表達人類白細胞抗原（human leukocyte antigen，HLA），促進免疫反應的定位。當IBEpiCs被各種損傷激活后，會分泌TNF-α、干擾素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）、IL-6、IL-8、CCL2、CXCL16、HLA等參與免疫調控。

02 肝內膽管上皮細胞與肝臟疾病
近些年的研究發現肝內膽管上皮細胞在膽汁淤積性肝病（cholestatic liver diseases，CLD）、肝纖維化( Hepatic fibrosis，HF) 和肝內膽管癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）等肝臟疾病中扮演著關鍵角色。隨著生物醫學的快速發展，3D細胞培養和類器官技術為生命科學和醫學研究提供了創新性解決方案。利用肝內膽管上皮細胞構建3D膽管模型、肝膽管類器官及膽管上皮細胞類器官等，可為肝膽疾病藥物篩選、毒性測試及再生機制等提供更加精準和高效的體外研究工具。

【膽汁淤積性肝病（cholestatic liver diseases，CLD）】
肝內膽管上皮細胞的作用 CLD是由各種原因引起的膽汁生成、分泌和排泄障礙，進而引發膽汁淤積和炎癥反應，最終導致膽管和肝細胞損傷。CLD最常見的類型包括原發性膽汁性膽管炎（primary biliary cholangitis，PBC）和原發性硬化性膽管炎（primary sclerosing cholangitis，PSC）。IBEpiCs作為膽汁流量和成分的主要調節者，與CLD的發生發展有緊密聯系。頂端連接復合體（apical junctional complexes，AJCs），如緊密連接和黏附連接，可在肝實質和膽汁毒物之間形成一道保護性物理屏障，AJC受到IBEpiCs表達的維生素D核受體（vitamin D nuclear receptor，VDR）的調節，研究表明當VDR缺乏時，AJC完整性的缺失會導致膽管結構缺陷。同時，細胞衰老、缺氧、膽汁毒性及藥物毒性會誘導IBEpiCs大量表達賴氨酰氧化酶樣蛋白2（lysyloxidase-like protein 2，LOXL2），LOXL2對IBEpiCs的屏障功能產生負性調節，促進PSC患者的肝損傷。”因此，IBEpiCs可構建膽汁淤積型膽管3D細胞模型和肝膽管類器官，用于膽汁淤積藥物篩選和毒性評價研究。

【肝纖維化( Hepatic fibrosis，HF)】
肝內膽管上皮細胞的作用 HF過程涉及多種細胞機制，其中肝內膽管上皮細胞上皮-間充質轉化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）和DR發揮重要作用。肝臟中的上皮細胞通過EMT會失去其典型的極性和黏附特性，獲得成纖維細胞表型，并大量表達EMT相關蛋白，促進纖維化形成。在對原發性膽汁性肝硬化患者的研究中發現，IL-17A誘導的IBEpiCs-EMT參與了該疾病的發病過程，IL-7A可能在體外誘導IBEpiCs發生成纖維細胞樣的形態學變化。另外有研究表明，非經典型NF-kB信號通路及其轉錄調控因子RELB是引發DR的核心介質，RELB在健康肝臟中是非必需的，但在慢性肝病中會被激活，抑制IBEpiCs中RELB基因的表達，將有助于改善肝纖維化。因此，IBEpiCs可用于體外構建肝纖維化膽管反應模型，為肝纖維化疾病機制研究提供重要線索。

【肝內膽管癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）】
肝內膽管上皮細胞的作用 ICC是來自于肝內膽管上皮的惡性腫瘤，可由多種疾病或因素導致，約占原發性肝癌的10%～15%。ICC被認為有多種細胞來源，如IBEpiCss、分化的肝細胞和肝祖細胞等多能干細胞。有學者使用細胞譜系追蹤系統來定位膽管上皮p53缺失，表明在慢性炎癥和p53缺失的情況下，IBEpiCs是ICC的起源細胞。近年來的研究發現，IBEpiCs中的miRNA失調以及DNA甲基化對ICC發生發展做出重要貢獻。例如誘導miR-21過表達，可間接增加ICC細胞的增殖和侵襲性；miR-200相關的ICC-EMT與腫瘤細胞的侵襲和轉移有密切聯系。因此，IBEpiCs可用于肝內膽管癌侵襲機制研究。

03 IPHASE 相關產品
綜上所述，肝內膽管上皮細胞（Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs)作為肝臟中重要的非實質細胞，在維持肝臟正常的生理功能方面具有不可替代的作用。同時，肝內膽管上皮細胞在肝膽疾病的發生、發展過程中發揮著重要的作用，其有可能作為肝膽疾病有效的治療靶點。因此，研究肝內膽管上皮細胞對于理解肝臟生理功能、疾病機制及開發新型治療策略等方面具有重大意義。鑒于此，IPHASE作為體外研究生物試劑引領者，憑借先進的設備、專業的技術人員和多年研發經驗，成功研發出人、猴、犬、大鼠及小鼠等多種屬的肝內膽管上皮細胞，為肝膽疾病機制與藥物篩選研究提供新模型。同時，IPHASE還可提供不同種屬的其他種類的原代肝細胞，可滿足客戶不同的試驗需求。

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