PIpetty電動(dòng)移液器在動(dòng)物布魯氏菌病檢測(cè)
（虎紅平板凝集試驗(yàn)RBT）中的應(yīng)用
     方 案 摘 要 ：

     動(dòng)物布魯氏菌病危害畜牧業(yè)與公共衛(wèi)生，虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）是重要篩查手段，但傳統(tǒng)手動(dòng)移液易產(chǎn)生誤差。本方案應(yīng)用 Pipetty 電動(dòng)移液器開展 RBT 檢測(cè)，利用其高精度活塞系統(tǒng)精準(zhǔn)移取試劑，借連續(xù)分液功能提升檢測(cè)效率。通過(guò)對(duì)比使用前后檢測(cè)準(zhǔn)確性、重復(fù)性與耗時(shí)等指標(biāo)評(píng)估效果，預(yù)期降低假陽(yáng)性、假陰性率，縮短大規(guī)模樣本檢測(cè)時(shí)間，為疫病防控提供可靠技術(shù)支持。

 
  方 案 詳 情 ：
  一、實(shí)驗(yàn)原理
      RBT是目前國(guó)內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的布魯氏菌病抗體檢測(cè)篩選方法之一，該方法經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)單快速、易操作，可人工判讀，也可通過(guò)與人工判讀比對(duì)等效的儀器判讀。WOAHISS 或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)血清稀釋，與抗原進(jìn)行 RBT 試驗(yàn)。標(biāo)準(zhǔn)血清 1：45 稀釋應(yīng)觀察到凝集，呈陽(yáng)性反應(yīng)，標(biāo)準(zhǔn)血清1：55稀釋時(shí)觀察不到凝集，呈陰性反應(yīng)。

二、?實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1、設(shè)配和材料

① Pipetty電動(dòng)移液器5-1000 μL及無(wú)菌槍頭。
② 混勻棒、計(jì)時(shí)器。
③ 反應(yīng)板。
  2、試劑和材料 ① 布魯氏菌虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原。
② 布魯氏菌陽(yáng)性對(duì)照血清和陰性對(duì)照血清。
 
三、實(shí)驗(yàn)步驟

1、在每次開始檢測(cè)樣品前，應(yīng)用陽(yáng)性對(duì)照血清和陰性對(duì)照血清分別與抗原進(jìn)行反應(yīng)，以確保試驗(yàn)條件適于檢測(cè)。
2、將待檢血清和抗原從冰箱取出，平衡至室溫（22 ℃±4 ℃）。
3、使用Pipetty自動(dòng)混勻功能輕輕混勻待檢血清后，設(shè)置連續(xù)分液模式，單次分液30μL，次數(shù)可按實(shí)驗(yàn)需求設(shè)置，等量加到反應(yīng)板上。

 
4、輕輕混勻抗原，在每份血清旁等量滴加30μL等量抗原。
5、立即將血清與抗原混合（每個(gè)樣品用一個(gè)干凈的混勻棒），混合成直徑約2cm的圓形或橢圓形。
 
6、 雙手端起反應(yīng)板，按不同方向輕輕搖晃反應(yīng)板，室溫（22 ℃±4 ℃）下作用4min后，在自然光或強(qiáng)燈光下立即觀察凝集情況。
注：檢測(cè)山羊和綿羊血清時(shí)，待檢血清與抗原的比例調(diào)整為3：1（如75μL血清：25μL抗原）能提高其檢測(cè)靈敏性。

四、結(jié)果判定

1、凝集反應(yīng)程度分為5個(gè)等級(jí)：

a） ++++：出現(xiàn)大的凝集片或顆粒，凝集塊間液體完全清亮透明;
b） +++：有明顯凝集顆粒，凝集塊間液體幾乎清亮透明;
c） ++：有較明顯凝集顆粒，凝集塊間液體稍清亮透明;
d） +：有微弱凝集，凝集物間液體渾濁;
e） -：無(wú)凝集，反應(yīng)混合液均勻渾濁。
 
2、同時(shí)滿足下列條件，判定試驗(yàn)條件成立：
a）陽(yáng)性對(duì)照血清出現(xiàn)“++”及以上凝集現(xiàn)象;
b）陰性對(duì)照血清無(wú)凝集“-”。
 
3、符合上述條件，結(jié)果判定如下：
a）待檢血清出現(xiàn)“+”及以上凝集現(xiàn)象時(shí)，判定為陽(yáng)性;
b）待檢血清出現(xiàn)“-”時(shí)，判定為陰性。