抗體藥物，包括單抗、雙抗、抗體片段、抗體偶聯藥物以及抗體融合蛋白等，具有靶向性強、特異性高和毒副作用小等特點，在自身免疫疾病與抗腫瘤領域大放異彩。面對龐大的市場需求，開發新型抗體藥物，優化下游生產工藝，具有非常重要的經濟價值與社會意義。

抗體純化工藝

抗體純化過程復雜，需結合多種分離手段設計出合理的純化流程，才能高效地獲得高質量產品。抗體下游工藝通常由以下步驟構成：

• 細胞澄清收獲，通過離心和過濾等方法去除細胞和細胞碎片；
• 親和捕獲， Protein A 親和層析捕獲抗體；
• 低pH孵育去除病毒；
• 中間純化與精純，去除產品和過程相關雜質；
• 納濾與超濾，去除病毒獲得最終抗體產品。

抗體分離純化中的層析技術

捕獲
該步驟目的是從大量成分復雜的發酵液中快速捕獲目的抗體，Protein A 源于金黃色葡萄球菌，特異性結合IgG FC片段，往往一步純化即可達到90%以上的純度，能捕獲人源抗體（非IgG3）及FC融合蛋白，是捕獲抗體蛋白最有效的層析手段。低pH洗脫銜接低pH孵育，病毒可有效減少7-8 log，后續僅需1-2步純化即可完成整個抗體的純化。選擇Protein A層析介質時，載量、流速、耐堿性、使用壽命以及Protein A殘留量是主要考量因素。

中間純化與精純
為達安全純度，捕獲后的抗體樣品應進一步去除宿主蛋白、宿主DNA、聚集體、抗體片段、內毒素和脫落的Protein A等產品和過程相關雜質，離子交換層析與疏水層析是該步驟常用的層析手段。

離子交換層析是依據抗體與雜質的帶電性差異來實現分離純化的目的，是抗體純化過程中關鍵步驟。陰離子交換層析常采用流穿模式去除內毒素、病毒、HCD、HCP等雜質。而陽離子交換層析則常選擇結合洗脫模式，在酸性條件下，多數抗體結合在介質上，通過增加洗脫緩沖液中的鹽濃度或提高pH進行洗脫，除雜效果明顯，尤其是兼具高分辨率與高選擇性的陽離子交換層析介質例如MegaPoly BXS、Diamond CD-S以及Diamond SP Mustang等在去除聚集體、宿主蛋白 HCP以及Protein A 方面效果顯著。

疏水層析與離子交換層析互補，多數情況下抗體的疏水性要強于大部分雜質，主要用于抗體聚集體和 HCP 的去除。HIC 介質的疏水性對收率和雜質去除效果有較大影響，因此選擇合適的配基是疏水層析的關鍵，常見的疏水作用層析配基的疏水性強弱順序如下：Butyl-S＜Butyl＜Octyl＜Phenyl。

除此之外，例如Diamond MMC與Diamond MIX-A等兼具疏水作用與離子交換作用的多模式填料越來越受到重視，這類新型的混合模式介質對宿主蛋白、脫落的配基以及多聚體等雜質具有高效的去除能力，可有效簡化純化步驟，增加純化效率。

隨著抗體藥物在臨床治療中的廣泛應用，下游純化工藝的開發顯得越發重 要，靈活運用各種層析模式與正確選擇層析填料將為抗體純化提供更經濟高效的工藝路線。

關于博格隆
博格隆成立于2008年，是一家專注于為分離純化提供高質量層析介質的高新技術企業，是中國較早具備大規模生產分離純化介質能力的企業之一。博格隆所提供的產品涵蓋各類分離純化介質、預裝柱、實驗室及工業生產級空柱、微載體，同時提供分離純化工藝開發服務及填料定制。