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抗豬塞內加谷病毒（SVA）單克隆抗體的介紹、制備方法及應用場景_abio生物試劑品牌網

abiopp6個月前 (06-23)技術46

抗豬塞內加谷病毒（Seneca Valley Virus, SVA）單克隆抗體在病毒檢測、致病機制研究及防控技術開發中具有關鍵作用。以下從毒株型號、抗體特性、制備方法、特異性參數及應用場景等方面詳細闡述相關技術參數：

一、SVA 主要毒株型號及抗原特性
（一） 基因型與代表毒株

SVA 屬于小 RNA 病毒科，目前全球分離株均屬于單一血清型，但根據 VP1 基因序列可分為不同基因型（如 Genotype 1 和 Genotype 2），代表性毒株如下：

基因型 代表毒株 分離地區 / 時間 抗原特點 Genotype 1 SVV-OHIO-2014 株美國，2014 年 VP1 蛋白第 140-160 位氨基酸為主要中和表位，與早期巴西毒株（SVV-BR-2002）同源性約 85%。 Genotype 2 SVA-CHN-2018 株中國，2018 年 VP1 蛋白 C 端（氨基酸 280-300）存在高變區，部分單抗對該基因型識別效率降低。 經典毒株 SVV-001 株加拿大，2002 年最早分離株，VP1 蛋白抗原表位較保守，常用于單抗制備的免疫原。（二） 關鍵抗原蛋白

VP1 結構蛋白：
- 構成病毒衣殼的主要表面抗原，含中和表位（如 G-H 環、C 端高變區） 和型特異性表位，其中 G-H 環（氨基酸 150-165）為廣譜中和抗體的主要靶點。
VP2/VP3 蛋白：
- 內部結構蛋白，含群特異性保守表位，可用于病毒通用檢測（如 ELISA 包被抗原）。

二、單克隆抗體的核心參數
（一） 抗體亞型與表位特異性 抗體類型 亞型 識別表位 特異性驗證 5E10 株單抗 IgG1 VP1 蛋白 G-H 環（氨基酸 152-165）與 SVV-OHIO-2014 株結合效價（ELISA）＞1:10?，與 Genotype 2 毒株交叉反應率＞90%。 3C7 株單抗 IgG2a VP1 蛋白 C 端高變區（氨基酸 290-300）特異性識別 Genotype 2（如 SVA-CHN-2018），與 Genotype 1 交叉反應率＜10%。 中和型單抗 IgG1 VP1 蛋白保守區（如第 80-100 位氨基酸）中和活性：抑制病毒與 PK-15 細胞結合，中和滴度（NT??）=1:1024，對兩基因型均有效。 VP2 特異性單抗 IgM VP2 蛋白 N 端（氨基酸 1-30）群特異性識別，與其他小 RNA 病毒（如 FMDV、PV）無交叉反應（ELISA OD＜0.03）。（二） 制備方法與關鍵參數

雜交瘤細胞株構建：
- 免疫原：重組 VP1 蛋白（如 SVV-OHIO-2014 株 VP1 的 1-300aa 片段，原核表達后純化）或滅活病毒顆粒（SVV-001 株）。
- 融合細胞：SP2/0 骨髓瘤細胞與免疫小鼠（BALB/c）的脾細胞融合，通過間接 ELISA 篩選陽性克隆，克隆化培養采用有限稀釋法（3 次）。
- 抗體純化：Protein G 親和層析，純度＞95%，內毒素＜0.1 EU/mg，抗體濃度 1-2 mg/mL。
特異性驗證指標：
- 交叉反應：
  - 與口蹄疫病毒（FMDV）、豬水皰病病毒（SVDV）等小 RNA 病毒無交叉反應（ELISA/IFA 驗證）。
  - 與豬圓環病毒（PCV）、豬瘟病毒（CSFV）等非小 RNA 病毒無結合（Western blot 陰性）。
- 中和活性：對同源毒株（如 SVV-OHIO-2014）的空斑減少率≥95%（抗體濃度 5 μg/mL），對異源毒株（如 SVA-CHN-2018）中和效率≥80%。

三、應用場景與技術參數
（一） 檢測方法中的應用

雙抗體夾心 ELISA：
- 包被抗體：5E10 株單抗（10 μg/mL），檢測抗體：HRP 標記的中和型單抗（1:5000 稀釋），檢測限（LOD）=1 ng/mL SVA 抗原。
免疫熒光（IFA）：
- 抗體濃度：10 μg/mL，可識別感染 SVA 的 PK-15 細胞內病毒抗原，熒光強度（MFI）＞2000，特異性熒光呈細胞質顆粒狀分布。
病毒中和試驗（VNT）：
- 中和型單抗（如 5E10）在 1:512 稀釋時可完全抑制 SVV-OHIO-2014 株感染，IC??測定值為 1.2 ng/mL，對 Genotype 2 毒株 IC??=3.5 ng/mL。

（二） 流行病學與疫苗研究

抗原變異監測：通過單抗結合試驗（MABA）分析野外毒株 VP1 的抗原漂移，例如 Genotype 2 毒株 VP1 第 295 位氨基酸突變（A→V）可導致 3C7 株單抗結合效率下降 50%。
疫苗效力評價：使用中和型單抗檢測免疫豬血清中的中和抗體滴度，評估疫苗對不同基因型毒株的交叉保護能力（如 Genotype 1 疫苗對 Genotype 2 的保護率需通過 VNT 驗證）。

四、注意事項

基因型差異影響：
- 由于 SVA VP1 高變區存在基因型差異，建議根據目標毒株基因型選擇單抗：
  - 通用檢測（如臨床樣品初篩）優先使用針對 VP1 保守區或 VP2 的廣譜單抗（如 5E10、VP2 特異性單抗）。
  - 分型研究需結合 Genotype 1/2 特異性單抗（如 3C7 株針對 Genotype 2）。
檢測方法優化：
- 檢測臨床樣品（如水皰液、口腔拭子）時，建議先用 VP2 群特異性單抗進行 ELISA 初篩，再用 VP1 型特異性單抗進行基因型鑒定。
- 中和試驗需在含 10% 胎牛血清的培養基中進行，以模擬體內抗體環境，孵育時間≥48 小時。
抗體保存與效價：
- 純化單抗需分裝保存于 - 20℃，避免反復凍融；工作液（1×PBS 稀釋）4℃可保存 2 周，效價下降≤10%。