一、什么是Soluble HLA免疫肽？ Soluble HLA（sHLA）是一種可溶性的人類白細胞抗原分子，與細胞膜上的膜結合型HLA（mHLA）不同，sHLA以可溶形式存在于血液等體液中, sHLA本身可作為免疫調節、疾病標志物。sHLA免疫肽是指與sHLA分子結合的肽段，這些肽段通常來源于細胞內的蛋白質降解產物，包括正常細胞蛋白和腫瘤相關蛋白。   二、可溶sHLA與常規mHLA比較  表1.sHLA與mHLA比較   三、百蓁生物新生抗原發現平臺——sHLA免疫肽發現升級    百蓁生物新生抗原發現平臺迎來sHLA免疫肽檢測重大升級，使用新鮮血液分離得到血漿，并結合特異性HLA抗體富集血漿中的sHLA免疫肽復合物，利用高分辨質譜平臺對洗脫的肽段進行從頭測序質譜鑒定，實現sHLA免疫肽的高特異性、高深度挖掘分析。   圖1. 血漿來源sHLA富集WB質控，   結果顯示：結合我們高特異性的樣本前處理平臺，可以使實現血液來源的sHLA復合物的高效率富集。利用全新的sHLA免疫肽分析平臺，我們實測了6個血漿樣本。從不同人的血漿樣本中，可以檢測到5000-10000條的sHLA免疫肽，檢測深度得到了很大的提升。對照蛋白組學領域巨擘Mattias Mann組2024年最/新發表的血漿sHLA免疫肽組文章結果，我們sHLA免疫肽鑒定的深度也與他們是相當的[1]。分析sHLA免疫肽的特征，結果表明sHLAI的免疫肽長度分布以9-mer為主，與mHLA一致。大部分樣本的sHLA免疫肽有70%以上被預測為可以與特定的HLA allele有結合，并且結果中我們也鑒定到了一些已報道與疾病相關的抗原蛋白質被遞呈出來的免疫肽。 圖2  a). sHLA總體免疫肽鑒定結果(All)和HLAI binders的數目 b) sHLA-I免疫肽長度分布   同時，我們用血漿sHLAI免疫肽與PBMC細胞的mHLAI免疫肽組比較，結果顯示兩者呈現出較為一致的免疫肽結合特征。取其中一個樣本的結果如下圖所示： 圖3.血漿來源sHLA免疫肽與PBMC來源的mHLA免疫肽的motif對應   分析 血漿sHLA和PBMC細胞 mHLA的免疫肽組，發現plasma的免疫肽有將近70%免疫肽與mHLA是一致的，進一步提示sHLA免疫肽具有mHLA免疫肽的特性。 圖4. 血漿來源sHLA免疫肽與PBMC來源的mHLA免疫肽比較韋恩圖   四、sHLA在腫瘤診斷與治療中的應用
1. 血漿sHLA免疫肽可作為潛在腫瘤診斷標志物 膠質母細胞瘤（Glioblastoma）是一種惡性腦部腫瘤，早期檢測和免疫治療可能有助于提高患者的生存率。研究者通過對膠質母細胞瘤患者和健康對照組的血漿可溶性HLA分子的免疫肽組進行了大規模分析，同時分析了患者腫瘤組織中膜結合型HLA的免疫肽組。結果發現sHLA免疫肽組中包含許多源自腫瘤抗原的mHLA肽段，說明血漿sHLA免疫肽組作為生物標志物來源的價值[2]。 膠質母細胞瘤sHLA免疫肽的實驗設計思路 2. 胸腔積液sHLA免疫肽可作為腫瘤新抗原的來源 研究者使用胸腔積液的澄清液、積液中的細胞沉淀，以及從癌癥患者的積液中培養的原發腫瘤細胞鑒定免疫肽，發現每個患者的膜結合型和可溶性HLA免疫肽組之間存在相關性，且同一患者在不同就診時間點獲得的可溶性HLA免疫肽組高度相似。與良性積液相比，惡性胸腔積液的可溶性HLA免疫肽組更大，并包含源自已知腫瘤相關抗原的HLA肽段，包括癌/睪丸抗原、肺相關蛋白和血管內皮生長因子通路蛋白。通過免疫肽組學鑒定的選定腫瘤相關抗原能夠成功激活CD8+T細胞。胸腔積液sHLA免疫肽組可以作為腫瘤診斷的豐富生物標志物來源，以及個性化免疫治療的潛在候選靶點[3]。 胸腔積液sHLA免疫肽實驗設計思路  
參考文獻： [1]. Wahle, Maria et al. IMBAS-MS Discovers Organ-Specific HLA Peptide Patterns in Plasma Molecular & Cellular Proteomics, 2024. Volume 23, Issue 1, 100689 [2]. Bracha Shraibman, et. al. Identification of Tumor Antigens Among the HLA Peptidomes of Glioblastoma Tumors and Plasma., Mol Cell Proteomics. 2018, 17(11):2132-2145. [3]. Khazan- Kost S, Cafri G, Melamed Kadosh D, et al. Soluble HLA peptidome of pleural effusions is a valuable source for tumor antigens. Journal for ImmunoTherapy of Cancer 2022;10: e003733. doi:10.1136/jitc-2021-003733.