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抗豬流行性腹瀉病毒S蛋白（PEDV-S）單克隆抗體制備和特性_abio生物試劑品牌網

abiopp6個月前 (06-17)技術43

抗豬流行性腹瀉病毒（PEDV）S 蛋白單克隆抗體是針對 PEDV 表面刺突蛋白（SPIke 蛋白，S 蛋白）的特異性抗體，因其在病毒入侵和免疫應答中的核心作用，成為 PEDV 研究、診斷及防控的關鍵工具。以下從分子特性、制備應用、研究進展等方面展開詳細說明：一、S 蛋白的生物學特性與抗體靶向意義

S 蛋白結構：
- PEDV 的 S 蛋白是由約 1300 個氨基酸組成的跨膜糖蛋白，可分為 S1 亞基（N 端，負責宿主細胞受體結合）和 S2 亞基（C 端，介導病毒與宿主細胞膜融合）。
- S1 亞基包含多個抗原表位（如 A、B、C、D 區），其中 S1 的 C 端（氨基酸 499-638）是中和抗體的主要結合區域（高變區），也是病毒變異的熱點區域。
靶向 S 蛋白的核心價值：
- 病毒入侵關鍵靶點：S 蛋白是 PEDV 感染宿主細胞的 “鑰匙”，其與宿主細胞表面受體（如氨肽酶 N，APN）的結合是感染的第一步，靶向 S 蛋白的單克隆抗體可直接阻斷病毒入侵。
- 免疫保護核心抗原：PEDV 疫苗（如滅活苗、亞單位苗）多以 S 蛋白為主要抗原，誘導機體產生針對 S 蛋白的中和抗體，是疫苗效力評估的關鍵指標。

二、抗 PEDV S 蛋白單克隆抗體的制備特點

抗原設計策略：
- 全長 S 蛋白：通過桿狀病毒表達系統或哺乳動物細胞表達全長 S 蛋白（三聚體結構），保留天然構象抗原表位，但表達難度高、純化復雜。
- S1 亞基片段：選擇 S1 亞基的高免疫原性區域（如 S1-C 端）進行重組表達（如大腸桿菌、酵母系統），抗原特異性強、免疫效率高，是常用策略。
- 表位肽合成：針對已知中和表位（如氨基酸 549-561）合成多肽抗原，免疫動物后篩選單克隆抗體，適用于精準靶向特定表位。
制備流程優化：
- 免疫動物選擇：除 Balb/c 小鼠外，倉鼠、兔等動物也可用于制備高親和力抗體（兔源抗體常具有更高的中和活性）。
- 篩選方法升級：通過流式細胞術（FACS）篩選能與活病毒表面 S 蛋白結合的雜交瘤細胞，可獲得更高效的中和抗體；或利用噬菌體展示技術直接篩選人源化單克隆抗體。

三、核心功能與應用場景
1. 病毒中和與治療研究

中和機制：高活性單克隆抗體可結合 S1 亞基的受體結合域（RBD），阻斷 S 蛋白與 APN 受體的結合，或抑制 S 蛋白的構象變化，阻止病毒膜與細胞膜融合。
治療潛力：將中和單克隆抗體（如腹腔注射或口服）用于新生仔豬，可在 PEDV 感染初期提供被動免疫保護，尤其適用于產房爆發疫情時的緊急干預。例如，研究顯示某株抗 S1-C 端單克隆抗體可使仔豬存活率提高 60% 以上。

2. 診斷檢測中的特異性應用

3. 疫苗研發與抗原表位分析

四、關鍵性能指標與評價

中和活性：
- IC??值：指抑制 50% 病毒感染所需的抗體濃度，優質中和抗體的 IC??可低至 10 ng/mL 以下（如針對 S1-C 端的單克隆抗體）。
- 中和譜：能否覆蓋不同基因亞型（G1a、G1b、G2a、G2b 等）的 PEDV 毒株，避免因 S 蛋白變異導致中和失效。
抗原結合特異性：
- 通過 Western blot、ELISA 等方法驗證抗體與天然 S 蛋白的結合能力，避免因重組抗原構象差異導致假陽性。
- 與 TGEV、PDCoV 等冠狀病毒的 S 蛋白無交叉反應，確保診斷準確性。
穩定性與適用性：
- 抗體在不同檢測體系（如 ELISA、IF、中和試驗）中的適用性，例如熒光標記抗體需適合細胞免疫熒光檢測，酶標抗體需適合 ELISA 或 IHC。

五、應用案例與研究進展

臨床診斷案例：
- 某豬場爆發仔豬腹瀉，使用抗 PEDV S1 蛋白單克隆抗體 ELISA 試劑盒檢測糞便樣本，陽性率達 85%，結合 RT-PCR 確認 PEDV G2b 亞型感染，為豬場防控提供依據。
治療性抗體研發：
- 中國農業科學院某團隊篩選出一株抗 S1 蛋白單克隆抗體（3D6），可特異性中和 G2b 亞型毒株，在仔豬攻毒試驗中，提前 24 小時口服抗體可使腹瀉發生率降低 70%，相關成果已申請專利。
表位研究進展：
- 最新研究發現，PEDV S 蛋白的 550-560 位氨基酸（位于 S1 亞基）是廣譜中和抗體的關鍵表位，針對該區域的單克隆抗體可同時中和 G1 和 G2 亞型毒株，為開發通用型疫苗提供了靶點。