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AOPI熒光染色法:細胞活率分析的標準化解決方案_abio生物試劑品牌網(wǎng)

abiopp7個月前 (06-09)技術(shù)64
生物制藥領(lǐng)域, 細胞活率分析 是評估產(chǎn)品安全性和有效性的關(guān)鍵質(zhì)控指標。無論是抗體、疫苗生產(chǎn),還是細胞治療和基因治療產(chǎn)品, 活細胞比例 直接決定了生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性和終產(chǎn)品的質(zhì)量。以CAR-T細胞產(chǎn)品為例,活率低于標準要求的細胞產(chǎn)品不僅療效不足,還可能引發(fā)嚴重不良反應(yīng) 。由國家藥品監(jiān)督管理局食品藥品審核查驗中心于2025年1月發(fā)布的《細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)檢查指南》中指出,CAR-T細胞產(chǎn)品主要檢測項目包括熒光法檢測細胞活率及活細胞密度。本文將為大家分享高精度、標準化的細胞活率分析方法。

關(guān)于AOPI熒光染色法
AOPI熒光染色原理
AOPI試劑由AO(Acridine Orange,吖啶橙)和PI(Propidium iodide,碘化丙啶)組成。其中,AO是一種異染性熒光陽離子染料,可滲透細胞膜,并嵌入所有細胞(活細胞和死細胞)的細胞核,檢測到綠色熒光。PI不能通過完整的細胞膜,只能進入死細胞的細胞膜,并嵌入死細胞的細胞核,檢測到紅色熒光。當(dāng)AO、PI試劑均存在于細胞中,在合適的染料配比下,染料間會發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移,致活細胞被激發(fā)出綠色熒光,死細胞被激發(fā)出紅色熒光。
 

使用CytScop系列智能細胞計數(shù)儀經(jīng)AOPI染色后獲得的代表性細胞圖像


傳統(tǒng)操作步驟 AOPI熒光染色法是一種可靠的分析細胞活率的方法, 但減少主觀因素影響,實現(xiàn)標準化操作才能獲得可靠性和一致性的結(jié)果

AOPI熒光染色法標準化的基石:微流控+AI模型

CytScop?Pro智能細胞計數(shù)儀通過微流控芯片全自動染色混勻、AI算法自動識別分析樣品,無需手動移液、染色、混勻、上樣、細胞活率分析等操作,實現(xiàn)全自動標準化細胞樣品活率分析,消除主觀因素對檢測結(jié)果的影響。檢測完成一個樣品后,自動清洗,確保樣品之間的檢測一致性,提高結(jié)果的可靠性和重復(fù)性。

微流控芯片
自動染色&混勻:AOPI染料集成于芯片流道,細胞懸液注入后自動溶解混合,消除人工配液誤差;專利的微米級通道設(shè)計使得樣品混勻過程保持樣品的完整性;使得儀器液路系統(tǒng)更加精簡, 用戶在日常操作中所需給設(shè)備清潔和維護工作量大幅降低。
雙熒光+明場大視野光學(xué)系統(tǒng)成像
CytScop的光學(xué)專利技術(shù)利用細胞與其周圍水介質(zhì)之間的微小折射率差異來增強細胞與其類似的透明溶液中產(chǎn)生高效的對比度。這種技術(shù)方法在明場模式下,能夠突出細胞的外觀形態(tài)和局部特征均能產(chǎn)生明顯的差異,具有非常好的立體感和極佳的細節(jié)表現(xiàn)能力。系統(tǒng)在暗場熒光下,系統(tǒng)能夠收集更多的熒光信號,從而增強不同波長的熒光特異性。 AI算法

CytScop?的AI模型能夠更科學(xué)地識別細胞凋亡/團簇團聚等復(fù)雜情況;模型運行時,不再需要人為設(shè)置各種參數(shù)閾值如直徑、亮度、圓度、系數(shù)等,對不同的細胞類型/生物工藝具有良好的可拓展性與更準確的泛化能力,使得分析結(jié)果更加準確。

綜上所述,基于AOPI熒光染色法并結(jié)合CytScop?細胞計數(shù)儀的自動化分析,為細胞治療產(chǎn)品的細胞活率分析提供了一個高精度、標準化的解決方案。通過完全自動化操作生成的客觀、可量化、可追溯數(shù)據(jù),為GMP合規(guī)性提供了堅實保障;其強大的細胞類型兼容性,使其能有效適應(yīng)不同來源、形態(tài)各異的復(fù)雜細胞樣本,覆蓋從中間過程控制及工藝評估等關(guān)鍵工藝步驟;同時,微流控技術(shù)的創(chuàng)新應(yīng)用顯著降低的樣本消耗量,使其對自體細胞等珍貴的治療性細胞樣本尤為友好,為細胞產(chǎn)品研發(fā)和生產(chǎn)提供更加準確、高效、便捷的細胞計數(shù)和分析解決方案。

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