無菌試驗(yàn)操作方法及流程與設(shè)備的選擇_abio生物試劑品牌網(wǎng)
無菌試驗(yàn)（Sterility test）是一種微生物檢驗(yàn)方法，用以確認(rèn)規(guī)范應(yīng)為無菌的產(chǎn)品是否受到微生物污染，常見于醫(yī)藥、生物科技、醫(yī)療器材制造等領(lǐng)域。
無菌試驗(yàn)的目的無菌試驗(yàn)適用于絕大多數(shù)規(guī)定為無菌的醫(yī)藥產(chǎn)品，如注射劑、眼藥水、固體藥物、各式無菌醫(yī)材等，應(yīng)用的產(chǎn)品范圍非常廣泛。
如果這些產(chǎn)品受到微生物污染，在接觸人體后可能導(dǎo)致藥效降低，甚至引發(fā)感染和其他嚴(yán)重并發(fā)癥。 因此，無菌試驗(yàn)的主要目標(biāo)是保障規(guī)定為無菌的藥品、醫(yī)療器材在經(jīng)過無菌制程（Aseptic manufacturing）、*終滅菌（Terminal sterilization）等出廠前作業(yè)流程后，不存在活體微生物，使其在臨床使用上不會(huì)影響藥效或是造成感染。
無菌的定義與國際規(guī)范
無菌的定義無菌是指樣品中不含活體微生物，為保障醫(yī)藥產(chǎn)品安全性的基礎(chǔ)要求。 國際上常以「無菌保證程度（Sterility Assurance Level， SAL）」作為滅菌確效的基準(zhǔn)，若SAL ≤ 10-6（樣品殘存的微生物污染機(jī)率小于等于百萬分之一）即符合無菌要求。
無菌試驗(yàn)的國際規(guī)范國際規(guī)范如ISO 11737-2、美國藥典（USP <71>）、歐洲藥典（EP）、日本藥典（JP）、中華藥典等技術(shù)規(guī)范中，均明文要求無菌試驗(yàn)的檢驗(yàn)環(huán)境、樣品制備與作流程，確保產(chǎn)品的無菌試驗(yàn)方式符合全球性的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，也為試驗(yàn)結(jié)果的可靠性提供保障。
無菌試驗(yàn)怎么做？
常見的無菌試驗(yàn)方法有兩種，分別是「微孔濾膜過濾法（Membrane Filtration Method）」和「直接接種法（Direct Inoculation Method）」。 根據(jù)國際醫(yī)藥品稽查協(xié)約組織（PIC/S）的規(guī)范，微孔濾膜過濾法和直接接種法皆需要在B級(jí)以上的無菌無塵室內(nèi)之A級(jí)無菌作臺(tái)進(jìn)行，作前可依據(jù)樣品特性選擇適合的作方法。
無菌試驗(yàn)方法一：微孔濾膜過濾法微孔濾膜過濾法是目前無菌試驗(yàn)*常用的方法之一，適合液體樣品、固體樣品、具管線的醫(yī)療器材等可沖洗、使用濾膜過濾的樣品。
微孔濾膜過濾法的原理是將樣品利用孔徑小于0.45um的濾膜進(jìn)行過濾，攔截可能存在的微生物，再將濾膜轉(zhuǎn)移至適當(dāng)?shù)?a href="http://www.yhtao8.cn/tags-39.html" target="_blank">培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，檢測樣品中是否有活體微生物的存在。
微孔濾膜過濾法所需設(shè)備
微孔濾膜過濾法所需設(shè)備通常包含真空泵、過濾座與濾膜。 若選用可重復(fù)使用之不銹鋼過濾杯，除了可以高溫高壓滅菌 （autoclave） 之外，也可以搭配本生燈進(jìn)行火焰滅菌，有效節(jié)省滅菌時(shí)間。
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微孔濾膜過濾法作流程
微孔濾膜過濾法的作流程大致可分為四階段：樣品預(yù)處理、樣品過濾、濾膜培養(yǎng)和結(jié)果判定，以下將依序說明。
1.樣品預(yù)處理：依據(jù)樣品的性質(zhì)，進(jìn)行微孔濾膜過濾法前需先做不同的預(yù)處理，處理方式可參考下表。
| 樣品種類 |
可過濾之液體 |
溶于肉豆蔻酸異丙酯之軟膏及油類 |
抗生素固體 |
標(biāo)示無菌之 |
| 預(yù)處理方式 |
可直接過濾，若檢品為黏稠液或懸浮液而不易過濾時(shí)，可用無菌液稀釋后再過濾以增快流速。 |
取適量樣品溶于肉豆蔻酸異丙酯，必要時(shí)可加熱至*44°C，并于溶解后立即過濾。 |
取適量樣品溶于無菌溶液后進(jìn)行過濾。 |
先以無菌溶液沖洗并收集溶液，再以此溶液過濾。 |
2.樣品過濾：將預(yù)處理好的樣品倒入過濾杯內(nèi)，啟動(dòng)真空泵產(chǎn)生負(fù)壓，將樣品通過濾膜過濾。 若樣品數(shù)量較多，可采用多連過濾座。
3.濾膜培養(yǎng)：過濾完成后，使用無菌鑷子將濾膜轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中密封，并置于培養(yǎng)箱用適當(dāng)溫度培養(yǎng)14日以上。
4.結(jié)果判定：觀察培養(yǎng)基是否變得混濁，以判斷是否有微生物生長。 若培養(yǎng)基沒有變化，表示無微生物生長，判定為符合無菌試驗(yàn)規(guī)定; 若培養(yǎng)基變得混濁，則表示樣品中有活體微生物，則判定為不符合無菌試驗(yàn)規(guī)定。
無菌試驗(yàn)方法二：直接接種法
直接接種法是針對不適合使用濾膜過濾的樣品而設(shè)計(jì)的無菌試驗(yàn)方法，例如無法過濾的溶液、無法溶解的固體或醫(yī)療器材等。 直接接種法直接將待測樣品置入適當(dāng)培養(yǎng)基中，藉由觀察培養(yǎng)基中微生物的生長狀況來判定樣品的無菌性。
直接接種法作流程直接接種法的作流程大致可分為三階段：樣品預(yù)處理、培養(yǎng)基培養(yǎng)和結(jié)果判定，以下將依序說明。
1.樣品準(zhǔn)備：將樣品準(zhǔn)備完成后，放入培養(yǎng)基內(nèi)。
| 樣品種類 |
固體樣品 |
液體樣品 |
醫(yī)療器材 |
| 準(zhǔn)備方式 |
使用適當(dāng)溶劑配置成懸浮液，確保樣品能均勻接觸培養(yǎng)基。 |
可直接取適量加入培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 |
將整個(gè)器材或其適當(dāng)部分直接浸泡于培養(yǎng)基中，并確保所有可能接觸微生物的表面均被培養(yǎng)基覆蓋。 |
2.培養(yǎng)基培養(yǎng)：將培養(yǎng)基密封放入培養(yǎng)箱，并于適當(dāng)溫度培養(yǎng)14天以上。
3.結(jié)果判定：觀察培養(yǎng)基是否變得混濁，以判斷是否有微生物生長，并記錄結(jié)果。 若培養(yǎng)基沒有變化，表示無微生物生長，判定為符合無菌試驗(yàn)規(guī)定; 若培養(yǎng)基變得混濁，則表示樣品中有活體微生物，則判定為不符合無菌試驗(yàn)規(guī)定。
無菌試驗(yàn)方法比較：微孔濾膜過濾法與直接接種法
微孔濾膜過濾法與直接接種法兩種無菌試驗(yàn)方法各有其適用范圍與優(yōu)勢，進(jìn)行無菌試驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)樣品特性選擇合適的方法，以確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。
| 比較項(xiàng)目 | 微孔濾膜過濾法 | 直接接種法 |
|---|---|---|
| 適用樣品 | 液體樣品、可溶解樣品、具管路的醫(yī)療器材 | 不適合濾膜過濾的樣品，如高黏度溶液或特殊醫(yī)療器材 |
| 作原理 | 使用孔徑 ≤0.45 μm 的濾膜攔截微生物，再將濾膜培養(yǎng) | 將樣品直接于培養(yǎng)基培養(yǎng)，觀察是否有微生物生長 |
| 所需設(shè)備 | 濾膜、真空泵、多連過濾座、不銹鋼過濾杯、滅菌設(shè)備（火焰滅菌本生燈或高溫高壓滅菌） | 培養(yǎng)基、無菌容器 |
| 培養(yǎng)天數(shù) | 14天以上 | 14天以上 |
無菌試驗(yàn)方法總結(jié)
無菌試驗(yàn)是醫(yī)藥與生技領(lǐng)域不可或缺的重要微生物檢測手段，透過微孔濾膜過濾法與直接接種法，能有效檢測產(chǎn)品是否受到微生物污染，進(jìn)而保障藥品與醫(yī)療器材的穩(wěn)定與使用的安全性！
延伸閱讀：微生物檢測與滅菌方式
附錄：微孔濾膜過濾法的真空過濾設(shè)備選擇
利用微孔濾膜過濾法進(jìn)行無菌試驗(yàn)前，需選擇可靠的過濾設(shè)備。 真空過濾系統(tǒng)是一種高效且經(jīng)濟(jì)的實(shí)驗(yàn)室過濾設(shè)備，能滿足各類樣品的過濾需求。
真空過濾系統(tǒng)的組合內(nèi)含：真空泵（或直接排水式抽水泵）、過濾座（三連座、六連座或十二連座）、濾膜，以及火焰滅菌本生燈，您可以依據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，自由搭配*適合的組合。
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| 真空過濾設(shè)備推薦 | 真空泵 | 多連過濾座 | 旋轉(zhuǎn)多連過濾座 | 火焰滅菌本生燈 |
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