合法和非法阿片類藥物使用日益普遍，導(dǎo)致越來越多胎兒發(fā)育過程中接觸這些藥物，這一現(xiàn)象令人擔(dān)憂。因?yàn)?5%的阿片類藥物暴露兒童隨著年齡增長會面臨各種行為挑戰(zhàn)，包括情緒、認(rèn)知和社交缺陷。推薦的阿片類藥物依賴治療方法是使用治療阿片類藥物使用障礙(MOUD)的藥物，例如methadone或buprenorphine，在孕期也可以使用。然而，methadone和buprenorphine可能會干擾胎兒的神經(jīng)發(fā)育過程，導(dǎo)致不良的行為后果。

本研究旨在探討妊娠期母親methadone或buprenorphine暴露對后代雌雄幼年游戲行為和成年社交行為的代際影響，采用孕期母鼠(F0)暴露于MOUD后如何影響幼鼠和成年鼠第一代 (F1)和第二代(F2)的社交行為測試研究。

材料與方法
將59只雌性大鼠隨機(jī)分配到三個(gè)不同的暴露組：methadone、buprenorphine或?qū)φ战M。每日對大鼠分別輸送10 mg/kg/天methadone和1 mg/kg/天buprenorphine或無菌水。除去死亡和未能成功交配的大鼠，總共有45只雌性（14 只對照、15 只methadone和 16 只buprenorphine）被納入作為F1代的母親。F1代大鼠完成行為學(xué)測試并達(dá)到15周齡后，用于繁殖F2代。共36只雌性和36只雄性F1代大鼠用于繁殖，分為12對對照組、11對methadone組和13對buprenorphine組。

社交游戲行為和超聲波發(fā)聲
在胎齡27-34周時(shí)，進(jìn)行社交游戲行為測試。將每只大鼠與來自另一個(gè)籠子、性別和年齡匹配的陌生伙伴配對，一起放在測試籠中15分鐘。使用行為觀察記錄分析系統(tǒng)(The Observer XT)對每對動物的游戲行為進(jìn)行手動評估。量化了與游戲相關(guān)的行為（猛撲、壓制和拳擊）的次數(shù)，以及用于社交和非社交探索的時(shí)間（表1）。在游戲過程中，使用連接到聲音行為分析系統(tǒng)(UltraVox XT)的超聲波麥克風(fēng)記錄超聲波發(fā)聲(USV)。對前5分鐘內(nèi)頻率在20至80 kHz之間的所有叫聲進(jìn)行手動計(jì)數(shù)和分類（表2）。
 

表1
  表2

三室社交互動測試
10周齡時(shí)，對子代大鼠進(jìn)行三室社交互動測試。測試裝置是一個(gè)有機(jī)玻璃盒，由帶有開口的玻璃分成三個(gè)大小相等的隔間。左右兩室的隔間中央各有一個(gè)鐵絲籠，用于飼養(yǎng)新來的大鼠。測試包括三個(gè)階段：習(xí)慣化（5 分鐘）、社交性測試（10 分鐘）和社交新奇性測試（10 分鐘）。在習(xí)慣化階段，將大鼠放置在中央隔間中，左右隔間的開口關(guān)閉。在社交性階段，將一個(gè)新的同性同種動物放置在側(cè)隔間的一個(gè)籠中，作為“社交刺激”，而位于另一側(cè)隔間的空籠則作為“非社交刺激”。隔板被抬起，允許大鼠在裝置的三個(gè)隔間中自由移動。在社交新奇階段，將第二個(gè)新的同性同種動物放置在空籠中。在社交性階段引入的同種動物現(xiàn)在作為“熟悉刺激”，而新的同種動物作為“新奇刺激”。使用攝像機(jī)記錄實(shí)驗(yàn)過程，并使用 動物運(yùn)動軌跡跟蹤系統(tǒng)(EthoVision XT)進(jìn)行追蹤。測定小鼠在社交階段和社交新奇階段在不同房間內(nèi)停留的時(shí)間。

  結(jié)果
雖然近年來我們對產(chǎn)前接觸 MOUD 對新生兒和幼兒影響的認(rèn)識有所加深，但關(guān)于其對青少年期和成年期的影響仍然存在空白。此外，阿片類藥物引起的代際傳播的影響尚未引起足夠的重視。因此，本文旨在研究母體（F0）接觸methadone或buprenorphine后，F(xiàn)1和F2代雄性和雌性大鼠后代的幼年游戲行為和成年社交互動。

產(chǎn)前暴露于buprenorphine的幼鼠（F1）表現(xiàn)出社交游戲行為減少，表現(xiàn)為猛撲和壓制次數(shù)減少（圖1A-B），而猛撲和壓制是大鼠社交游戲行為的關(guān)鍵特征。游戲行為的減少在雄性幼鼠中最為明顯。還發(fā)現(xiàn)F2代幼鼠的社交游戲行為減少。F1代在產(chǎn)前暴露于buprenorphine，其后代表現(xiàn)出猛撲和壓制行為減少，這與F1代的發(fā)現(xiàn)一致。buprenorphineF2組的雄性和雌性均表現(xiàn)出猛撲和壓制行為減少（圖2A-B）。兩代幼鼠用于社交探索（例如嗅探或梳理伴侶）的時(shí)間均保持不變，表明buprenorphine特別影響與更具活力的社交行為（例如社交游戲）相關(guān)的方面。兩代存在性別差異：buprenorphine暴露對F1代男性的社交游戲行為產(chǎn)生顯著影響。在F2代中，methadone暴露父母的男性子女在社交探索上花費(fèi)的時(shí)間顯著少于對照組，表明他們對社交互動的興趣降低，而女性則沒有觀察到任何影響。與女性相比，男性似乎更容易受到產(chǎn)前阿片類藥物暴露的長期影響。
  圖1
  圖2

社交游戲中USV數(shù)據(jù)顯示，暴露對F1代總叫聲次數(shù)或任何叫聲類型均無總體影響。成對比較顯示，F(xiàn)1代與對照組相比，出生前暴露于buprenorphine的F1雌性發(fā)出的顫音更多（圖3B，雌性）。對于社交游戲中的F2代USV，對總叫聲數(shù)量沒有總體影響。成對比較顯示，與對照組相比，methadone組的F2動物發(fā)出了更多的顫音，而buprenorphine組的動物發(fā)出了更多的短叫聲（圖4B，雄性+雌性）。此外，methadone組的雄性與對照組相比發(fā)出了更多的顫音（圖4B，雄性）。
 

圖3
  圖4

三室社交互動測試中，暴露對F1代社交性指數(shù)有總體影響，但成對比較顯示阿片類藥物暴露動物與對照組之間無顯著差異。性別對F1代社交新穎性指數(shù)有總體影響，其中雌性動物的社交新穎性指數(shù)高于雄性動物。未發(fā)現(xiàn)暴露和性別之間的相互作用，并且每個(gè)性別的暴露組之間無明顯差異。F2代無論是對社交性指數(shù)還是社交新穎性指數(shù)，暴露均無主效應(yīng)。

總結(jié)
本文的研究首次揭示了阿片類藥物使用障礙(MOUD)的代際效應(yīng)。孕期接觸buprenorphine（而非methadone）降低了F1代和F2代后代的社交游戲行為，表現(xiàn)為猛撲和壓制次數(shù)減少，而猛撲和壓制是大鼠社交游戲的兩個(gè)最典型參數(shù)。兩代成年大鼠的社交互動均未受到產(chǎn)前 MOUD暴露的影響。

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