α2-抗纖溶酶的作用機制及檢測原理和方法_abio生物試劑品牌網
α2-AP簡介
α2-抗纖溶酶是一種分子量為63 kD的單鏈糖蛋白，其編碼基因SERPINF2位于17號染色體短臂（17p13），包含10個外顯子和9個內含子。該蛋白主要由肝臟合成，血漿濃度約為1 μM（70 μg/mL），約為Glu-PLG濃度的1/3至1/2，是PAI-1濃度的1000倍以上。此外，α2-AP還存在于血小板的α顆粒中，可在血小板激活時分泌，并在腎臟和大腦中被檢測。
α2-AP在循環中以游離形式或與纖溶酶/纖溶酶原結合的形式存在，其半衰期（T?）約為2.6天。其N末端的谷氨酰胺殘基（Gln14）是與纖維蛋白交聯的結合位點，可在FXIIIa作用下與纖維蛋白α鏈C末端的賴氨酸殘基（Lys303）結合，從而保護纖維蛋白免于過早溶解。C末端的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）序列是纖溶酶/纖溶酶原的結合區域，而精氨酸殘基（Arg376）是纖溶酶原的切割位。
α2-AP分子的N末端和C末端可發生多種翻譯后修飾。根據N末端的不同，可分為兩種主要異構體：Met-α2-AP（含464個氨基酸，N末端為蛋氨酸，約占30%）和Asn-α2-AP（含452個氨基酸，N末端為天冬酰胺，約占30%）。Met-α2-AP可在抗纖溶酶切割酶（APCE）和成纖維細胞激活蛋白（FAP）作用下轉化為Asn-α2-AP。Asn-α2-AP的抗纖溶活性更強，與纖維蛋白交聯的速度是Met-α2-AP的13。
α2-AP與纖溶酶的作用機制
1. α2-AP通過C末端的精氨酸殘基與纖溶酶的Kringle結構域的精氨酸結合位點結合，形成非共價復合物
2. 纖溶酶裂解α2-AP Met分子377-Arg376間的肽鍵，使其構象發生變化，并形成穩定的、共價結合的中間復合物PAP，其半衰期約為0.5。此外，α2-AP還可抑制中性粒細胞彈性蛋白酶、胰蛋白酶和活化蛋白C的活。
α2-AP檢測原理與方法
免疫學檢測法
酶聯免疫吸附測定（ELISA）可用于檢測血漿中游離總α2-AP。該方法首先利用生物素化的單克隆抗體識別并捕獲α2-AP的所有四種N端和/或C端修飾的異構體，隨后使用辣根過氧化物酶（HRPO）標記的多克隆抗α2-AP抗體進行抗原捕獲并檢。此外，免疫比濁法和膠乳凝集法也可用于α2-AP的測。
功能測定法
1. 發色底物法
將含有α2-AP的患者血漿與過量纖溶酶共同孵育。纖溶酶被α2-AP迅速滅活，殘留的纖溶酶裂解發色底物，通過測量405 nm處的吸光度變化進行定量分析。吸光度變化與α2-AP濃度呈反比關。
2. 微孔板發色底物法
將纖溶酶固定于微孔板上，加入待測樣本后，具有功能活性的α2-AP與纖溶酶結合并發生反應。洗滌后加入抗α2-AP抗體，再使用辣根過氧化物酶標記的二抗。加入底物TMB后，記錄405 nm處的顏色變化。顏色變化程度與原始血漿樣本中α2-AP的活性呈正。
結果解讀
遺傳性α2-AP缺乏癥
遺傳性α2-AP缺乏癥是一種罕見的常染色體隱性遺傳病，最初被稱為Miyasato病。純合缺陷患者的α2-AP濃度通常低于0.10 IU/mL，易發生嚴重出血或創傷后遲發性出血（如拔牙、手術后或皮膚黏膜出血），需與一期止血缺陷進行鑒別。實驗室檢查顯示，凝血酶原時間（PT）和活化部分凝血活酶時間（APTT）等常規凝血篩查結果正常，但血栓彈力圖（TEG）或旋轉血栓彈力圖（ROTEM）結果可能異。雜合缺陷者的α2-AP水平在0.30 - 0.60 IU/mL之間，通常無癥。
獲得性α2-AP缺乏
獲得性α2-AP缺乏可能見于肝臟疾病、淀粉樣變、急性白血病、彌散性血管內凝血（DIC）或纖溶治療期。
α2-AP升高
有研究證據表明，α2-AP含量升高與心血管疾病風險增加或預后不良相關。α2-AP水平增高可導致靜脈血栓、肺栓塞、動脈血栓和缺血性中風。此外，α2-AP還可促進微血管血栓形。糖尿病患者血漿中α2-AP水平增加，且與糖尿病晚期視網膜病變相關，尤其在女性患者中更為常。在肺動脈高壓（PAH）患者中，循環α2-AP水平的顯著升高被認為是其病理生理學的關鍵因素，與較差的預后和較高的死亡率相。此外，α2-AP還與阻塞性睡眠呼吸暫停（OSA）、心肌病、充血性心力衰竭和心房顫動存在顯著關。
杭州斯達特 (www.starter-bio.com)志在為全球生命科學行業提供優質的抗體、蛋白、試劑盒等產品及研發服務。依托多個開發平臺：重組兔單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗、重組蛋白開發平臺（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）,已正式通過歐盟98/79/EC認證、ISO9001認證、ISO13485。
本站“ABIO生物試劑品牌網”圖片文字來自互聯網
如果有侵權請聯系微信: nanhu9181 處理，感謝~
