活細胞動態(tài)成像及分析系統(tǒng)在細胞毒性研究中的應(yīng)用_abio生物試劑品牌網(wǎng)
在生命科學(xué)研究領(lǐng)域，細胞毒性和氧化應(yīng)激的研究意義重大，應(yīng)用極為廣泛，常用的檢測方法包括 MTT 法、CCK8 法等。這些傳統(tǒng)的終點檢測技術(shù)，在反應(yīng)結(jié)束后得到細胞增殖和毒性結(jié)果，無法捕獲細胞動態(tài)變化的全過程，可能出現(xiàn)假陽性數(shù)據(jù)。另外，需要耗費大量的試劑和時間進行條件優(yōu)化和篩選，耗時費力，效率不高。來自暨南大學(xué)再生醫(yī)學(xué)院教育部重點實驗室的研究人員，采用活細胞動態(tài)成像及分析系統(tǒng)進行細胞研究實驗，更高效的監(jiān)測細胞狀態(tài)變化。
在本研究中，作者采用了德國 innoME 公司自主研發(fā)和生產(chǎn)的 zenCELL owl 活細胞動態(tài)成像及分析系統(tǒng)進行實驗。該設(shè)備采用非侵入，無標記的實時分析方法，置于培養(yǎng)箱內(nèi)，通過實時圖像技術(shù)，實現(xiàn)自動遠程監(jiān)測和分析箱內(nèi)細胞的生長狀態(tài)、細胞數(shù)量等信息，24 通量的設(shè)計，可同時滿足監(jiān)測 24 個樣本的高通量需求，相當于在培養(yǎng)箱內(nèi)裝上了 24 個“透視眼”，能隨時觀察并記錄細胞的生長變化過程，是一種高效、快速、經(jīng)濟的研究方式。
研究人員進行了兩組實驗：
第一組實驗將 293T 細胞以5×10 4個的接種數(shù)量接種于 24 孔培養(yǎng)板中，分別用25μM和250μM 的 H 2O 2 處理，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 小時后，更換新的培養(yǎng)液。然后采用 zenCELL owl 活細胞動態(tài)成像及分析系統(tǒng)監(jiān)測24 小時，每 30min 采集一次圖像，數(shù)據(jù)通過GraphPad Prism 8統(tǒng)計分析軟件進行分析和繪制。
通過數(shù)據(jù)分析及圖像比較發(fā)現(xiàn)，25μM 的 H 2O 2對 293T 細胞沒有明顯影響，細胞正常增殖，其增殖活性與對照組相同；但高濃度250μM 的 H 2O 2就像 “細胞殺手”，作用 6 小時后對細胞造成不可逆的損傷，細胞變圓脫落，細胞匯合度降低。這說明250μM H 2O 2能夠誘導(dǎo)293T細胞死亡，而25μM H 2O 2對細胞沒有明顯的細胞毒性作用。活細胞動態(tài)成像及分析系統(tǒng)能實時監(jiān)測 H 2O 2對 293T 細胞的毒性作用。
第二組實驗細胞采用的是心臟微血管內(nèi)皮細胞（CMECs，Cardiac Microvascular Endothelial Cells）。從3個月大的雄性 SD （Sprague-Dawley）大鼠獲取CMECs，以1×10 4個細胞的接種數(shù)量將其接種于 24 孔培養(yǎng)板中，分別用濃度為100nM、250nM、500nM 和 1000nM 的阿霉素（Dox）處理，24 小時后更換新鮮培養(yǎng)基，并用 zenCELL owl 活細胞動態(tài)成像及分析系統(tǒng)監(jiān)測 5 天，每隔 1 小時采集一次圖像，所得數(shù)據(jù)用GraphPad Prism 8統(tǒng)計分析軟件進行分析和繪制。
通過數(shù)據(jù)分析及圖像比較發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過 Dox 處理 6 小時后，所有實驗組細胞都停止分裂，而對照組細胞正常增殖；15 小時后，實驗組細胞出現(xiàn)細胞碎片。Dox 濃度越高，CMECs 細胞的密度就越低，當 Dox 濃度達到 250nM 時，細胞密度明顯下降。也就是說250 nM及以上劑量的Dox能夠誘導(dǎo)CMECs的細胞毒性作用。這也驗證了活細胞動態(tài)成像及分析系統(tǒng)能有效監(jiān)測 Dox 對 CMECs 細胞的毒性。
這項研究通過活細胞動態(tài)成像及分析系統(tǒng)觀察和分析了H 2O 2在293T細胞中誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激細胞毒性作用和 Dox在CMECs中誘導(dǎo)的細胞毒性作用。研究結(jié)果表明，zenCELL owl 活細胞動態(tài)成像及分析系統(tǒng)在培養(yǎng)箱內(nèi)同時原位監(jiān)測 24 個細胞樣本，捕捉的圖像和每個視野里的細胞密度匹配度高，可通過對比細胞增殖和密度差異，定量分析細胞毒性。之前也有研究表明，活細胞動態(tài)成像及分析系統(tǒng)分析麥冬皂苷 D 對心肌細胞系 H9C2 增殖的結(jié)果，和 CCK - 8 法得出的結(jié)果一致。所以，活細胞成像系統(tǒng)在細胞毒性分析方面既可行又可靠。
德國InnoME公司自主研發(fā)和生產(chǎn)的zenCELL owl活細胞動態(tài)成像及分析系統(tǒng)，基于非標記、非侵入方法，原位記錄細胞實時生長和定量的分析數(shù)據(jù)。zenCELL owl體積小巧，耐溫耐濕，可在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)長時間連續(xù)工作；通過24個顯微成像鏡頭，對24個視野進行連續(xù)的動態(tài)監(jiān)測和圖像獲取。zenCELL owl為用戶提供高質(zhì)量圖像、視頻、統(tǒng)計學(xué)曲線和定量數(shù)據(jù)，實現(xiàn)細胞增殖／增殖抑制、細胞培養(yǎng)質(zhì)控／培養(yǎng)優(yōu)化、遷移／侵襲等諸多活細胞動態(tài)過程的監(jiān)測。
環(huán)亞生物，生命科學(xué)產(chǎn)品全國性代理商，不斷把國外頂級的創(chuàng)新產(chǎn)品引入中國。環(huán)亞生物具備完善的公司運營、產(chǎn)品管理、營銷、售前技術(shù)支持和售后維修體系。環(huán)亞生物作為zenCELL owl大中華區(qū)獨家代理商，負責(zé)zenCELL owl產(chǎn)品大中華區(qū)的營銷和售后支持。
更多資訊請訪問文獻全文鏈接：
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地址：上海市松江區(qū)莘磚公路518號9幢502室
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研究人員進行了兩組實驗：
第一組實驗將 293T 細胞以5×10 4個的接種數(shù)量接種于 24 孔培養(yǎng)板中，分別用25μM和250μM 的 H 2O 2 處理，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 小時后，更換新的培養(yǎng)液。然后采用 zenCELL owl 活細胞動態(tài)成像及分析系統(tǒng)監(jiān)測24 小時，每 30min 采集一次圖像，數(shù)據(jù)通過GraphPad Prism 8統(tǒng)計分析軟件進行分析和繪制。
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