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自動高通量法測定杉木對多回線蟲的殺蟲活性_abio生物試劑品牌網

abiopp7個月前 (05-13)技術46

Antihelminthic Activity of Lophira Lanceolata on Heligmosomoides polygyrus Using an Automated High-Throughput Method” 發表于Journal of TroPIcal Medicine,研究發現披針葉羅庚梅提取物對多形螺旋線蟲有抗蠕蟲活性,但需進一步研究其安全性和毒性。

1.研究背景:蠕蟲病在非洲發展中國家流行,因缺乏關注和資金被列為被忽視的熱帶病。現有合成驅蟲藥出現耐藥性、有副作用且不易獲取,喀麥隆當地常用草藥治療蠕蟲病。披針葉羅庚梅在傳統醫學中應用廣泛,本研究用自動化高通量方法評估其抗蠕蟲活性。

2.材料和方法

實驗材料:多形螺旋線蟲感染性三期幼蟲由英國愛丁堡大學提供;披針葉羅庚梅葉子采自喀麥隆西部,經國家植物標本館鑒定并編號;制備水提物和醇提物;通過浮選技術收集和濃縮蟲卵,培養蟲卵獲取 L1 和 L2 幼蟲。

實驗方法:采用自動化高通量設備 WMicrotracker,進行蟲卵孵化試驗和幼蟲運動性測定評估提取物抗蠕蟲活性,同時對提取物進行植物化學成分篩選。研究遵循倫理準則,數據用 GraphPad Prism 8.0 分析,計算半數抑制濃度()評估抗蠕蟲效果。

3.實驗結果

水提物和醇提物對蟲卵孵化率的影響:橫坐標為提取物濃度及對照,縱坐標為蟲卵孵化率。5mg/mL 時,水提物和醇提物孵化率分別為 5.0±5.0% 和 11.66±2.8% ,蒸餾水和 1.5% DMSO 孵化率 100%。0.3125mg/mL 和 0.625mg/mL 時,醇提物孵化率較高,分別為 65±8.6% 和 76.66±15.2%,直觀展示提取物抑制蟲卵孵化效果。

蟲卵孵化的半數抑制濃度():橫坐標為濃度對數(mg/mL),縱坐標為抑制率。醇提物IC50為1.4mg/mL ,水提物未確定,表明醇提物對蟲卵孵化抑制作用更強。

水提物和醇提物對多形螺旋線蟲 L1 幼蟲運動抑制率:橫坐標為提取物濃度及對照,縱坐標為幼蟲運動抑制率。5mg/mL 時,水提物和醇提物抑制率分別為 86.66±5.77 和 96.66±6.44 ,均接近陽性對照左旋咪唑(96.67±2.88),蒸餾水和 1.5% DMSO 抑制率 0%,顯示提取物對 L1 幼蟲運動抑制效果及濃度依賴關系。

L1 幼蟲運動的半數抑制濃度():橫坐標為濃度對數(mg/mL),縱坐標為抑制率。水提物和醇提物IC50分別為 1.85mg/mL 和 2.4mg/mL,表明醇提物對 L1 幼蟲運動抑制活性更強。

水提物和醇提物對多形螺旋線蟲 L2 幼蟲運動抑制率:橫坐標為提取物濃度及對照,縱坐標為幼蟲運動抑制率。5mg/mL 時,水提物和醇提物抑制率分別為 93.33±5.77 和 100±0.0 ,差異顯著,蒸餾水和 1.5% DMSO 無抑制作用,左旋咪唑抑制率 100%,體現提取物對 L2 幼蟲運動抑制效果及濃度依賴關系。

L2 幼蟲運動的半數抑制濃度():橫坐標為濃度對數(mg/mL),縱坐標為抑制率。水提物和醇提物分別為 1.08mg/mL 和 1.02mg/mL,表明醇提物對 L2 幼蟲運動抑制活性更強。

結果表明:

蟲卵孵化試驗:5mg/mL 時,水提物和醇提物顯著抑制蟲卵孵化;醇提物的為 1.4mg/mL ,水提物未確定,表明醇提物對蟲卵孵化抑制作用更強。

幼蟲運動性測定:5mg/mL 時,水提物和醇提物對 L1、L2 幼蟲運動性抑制明顯,呈濃度依賴性;L1 幼蟲中,醇提物和水提物分別為 1.85mg/mL 和 2.4mg/mL;L2 幼蟲中,二者分別為 1.02mg/mL 和 1.08mg/mL,顯示醇提物活性更高。植物化學成分篩選顯示水提物化學成分種類更多。

4.研究討論:醇提物對蟲卵孵化抑制作用可能與提取物中的皂苷有關,其抑制蟲卵孵化結構發育或影響蟲卵滲透。提取物對 L1、L2 幼蟲有殺幼蟲活性,醇提物效果更佳,L1 幼蟲更敏感。提取物的抗蠕蟲特性可能源于其所含的多種次生代謝物。

5.研究結論:本研究科學驗證了披針葉羅庚梅在喀麥隆民間醫學中對抗蠕蟲的作用,但需進一步開展體內實驗和毒性測試,以評估其安全性,確定能否作為抗寄生蟲藥物。

WMicrotracker小動物活動力分析系統,為測試培養于液體中的小模式動物而優化設計,在24、48、96或384孔板中自動量化小模式動物的行為活動。已成功證明了可應用于例如線蟲(C.elegans)、斑馬魚幼蟲(Zebrafish larvae)和其它昆蟲幼蟲(insects larvae),應用于化合物篩選、RNAI/嗎-啉試驗、轉基因試驗、長周期測試或自定義實驗;毒性測試、麻痹試驗、代謝試驗、疾病模型、突觸調節器、抗逆性、健康期(衰老)、趨化性、卵孵化等實驗。
 

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